Подсчет правам нервные стволовые клетки

Теперь я покажу вам, как подсчитывать человеческие клетки-предшественники нейронов, и вы будете считать свои клетки, когда вы хотите поместить их для иммунохимии или когда вы хотите провести трансфекцию с помощью машины ядерного фактора. Я использую фазово-контрастный гемоцитометр с краевой сеткой, а также мы используем краситель под названием трип и синий. А краситель полезен тем, что может дифференцировать живые и мертвые клетки.

Мертвые или умирающие клетки впитывают этот краситель и кажутся синими. Когда вы смотрите на клетки в гемо, цитометре и живых клетках, они способны исключать этот краситель и они, они, они не кажутся синими. Таким образом, вы сможете определить жизнеспособность ваших клеток для приготовления раствора трипа и синего цвета, а также среды.

Я собираюсь добавить 20 микролитров ловушки и синего раствора в эту эпипробирку 0,5 мил. А затем я добавлю 25 микролитров среды. Таким образом, сейчас у меня есть 45 микролитров синего раствора и раствора, так что когда я добавлю пять микролитров клеточной суспензии, у меня получится разведение от одного до 10.

И теперь я собираюсь добавить пять микролитров клеточной суспензии. Во-первых, я собираюсь убедиться, что клетки хорошо ресуспендированы за счет вихревых движений пальцев. Так что теперь я хочу убедиться, что это решение хорошо смешалось.

Поэтому я собираюсь несколько раз поставить кровать вверх и вниз. И, наконец, я собираюсь загрузить около 12 микролитров этой клеточной суспензии в гемоцитометр. У него есть, у него есть два порта, и вы можете, вы можете использовать любой из них.

Таким образом, все, что вам нужно сделать, это ввести раствор в этот порт, и жидкость будет всасываться капиллярным действием. И теперь я готов считать. Вот взгляд на цитометр гемо при 10-кратном увеличении, и здесь у нас есть квадрант, который содержит 16 квадратов.

И как видите, мы можем наблюдать здесь живые и мертвые клетки. Здесь у нас есть живые клетки, такие как эта, эта и эта. И у нас также есть некоторые мертвые клетки, такие как эта.

Если вы заметите, мертвая клетка выглядит темно-синей, в то время как живые клетки окружены градом. Итак, теперь я собираюсь посчитать все живые клетки. Итак, я собираюсь двигаться слева направо и сверху вниз.

1, 2, 3, 4, 5, 6, 33, 1 32, 33, 34, 3 5, 3 6. Таким образом, у нас есть три шесть ячеек в этом квадранте. Поэтому, когда я вижу ячейки, которые находятся на границе квадранта, например, вдоль этой линии вот здесь, чтобы быть последовательным, я подсчитываю ячейки, которые находятся на левой границе и на верхней границе.

И я постоянно подсчитываю клетки на этих границах для всех квадрантов на гемоцитометре. Итак, теперь мы собираемся рассчитать, сколько клеток у нас на микролитр. И чтобы сделать это, я возьму среднее значение ячеек на квадрант, которое равно 38, и умножу на 10, что является коэффициентом, определяемым размерами камеры.

И мы также умножим на 10, что в данном случае является нашим коэффициентом разбавления. И в конце концов, мы получим количество клеток на микролитр. Таким образом, в данном случае мы имеем 3 800 клеток на микролитр.

А поскольку мы подвешиваем наш поддон с ячейками в 500 микролитрах раствора, вы можете рассчитать, сколько всего у вас клеток. И все готово.