Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 7:50 мин. • July 8th, 2025
Метод цифровой ПЦР на основе чипа разделяет одну реакцию на камеры наножидкого чипа. Амплификация разделенных последовательностей позволяет обнаруживать редкие варианты транскриптов — неканонические транскрипты, встречающиеся с низкой частотой.
Для начала возьмите образец, содержащий кДНК целевого редкого варианта транскрипта и общего варианта. Добавьте раствор, содержащий термостабильную ДНК-полимеразу, dNTP и праймеры.
Добавьте распространенные и редкие олигонуклеотидные зонды, специфичные для вариантов транскриптов, помеченные различными флуоресцентными репортерами и молекулами гасителя. Гаситель поглощает флуоресценцию репортера, когда находится в непосредственной близости.
Загрузите смесь на нанофлюидный чип. Решение разделено на нанокамеры одинакового размера. Каждая камера, содержащая кДНК, служит самостоятельным реакционным сосудом.
Запустите процесс термоциклирования. Высокая температура денатурации разделяет двухцепочечную ДНК на одинарные нити. Уменьшите температуру, что позволит праймерам и олигонуклеотидным зондам отжигать комплементарные участки на отдельных цепях ДНК.
Увеличьте температуру, чтобы достичь стадии удлинения, когда ДНК-полимераза удлиняет праймер и расще
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео