Визуализация активации каспаз в моноцитарных макрофагах человека

В иммунных клетках каспаза-1, воспалительная каспаза, является ключевым иммуночувствительным компонентом, который существует в неактивной форме. Эти неактивные формы состоят из про-домена, слитого с каталитическим доменом, и становятся активными посредством димеризации, вызванной близостью.

Чтобы визуализировать активацию каспаз in vivo, начните с культуры трансфицированных макрофагов, полученных из моноцитов человека, экспрессирующих красные флуоресцентные белки и пару флуоресцентных комплементационных репортерных белков. Репортерные белки содержат продомен каспазы-1, слитый с нефлуоресцентными фрагментами белка Венеры, либо Venus-N, либо Venus-C.

Обрабатывайте клетки средой визуализации, содержащей липополисахариды — бактериальный стимулятор воспаления, и ионофоры калия — нигерицин.

Липополисахариды взаимодействуют с рецепторами распознавания образов на макрофаге, инициируя сборку инфламмасомного комплекса.

Молекулы нигерицина проникают в клетку и связываются с ионами калия, вызывая их отток во внеклеточную среду и снижая внутриклеточную концентрацию ионов калия. Это приводит к праймингу сенсорных белков инфламмасомы с адапторными белками — белком-мостом между сенсорным белком и