Флуоресцентный анализ с использованием сконструированных лимфоцитов для скрининга иммуномодулирующих соединений

Начните с совместимого с флуоресцентными материалами многолуночного планшета, содержащего суспензию трансгенных Т-лимфоцитов, полученных от мышей.

Эти лимфоциты содержат зеленый флуоресцентный белок или кассету экспрессии GFP, контролируемую Т-клеточным рецептором или взаимодействием TCR с иммуномодулирующими соединениями.

Обработайте каждую лунку раствором, содержащим иммуномодулирующие соединения с разным потенциалом.

Во время инкубации иммуномодулирующие соединения взаимодействуют с TCR на Т-лимфоцитах.

Взаимодействие TCR со стимулирующим соединением запускает активацию генной кассеты, повышая экспрессию GFP.

Напротив, взаимодействие TCR с ингибирующим соединением ингибирует генную кассету и снижает экспрессию GFP.

Затем покройте клетки флуоресцентным красителем на основе нуклеиновых кислот, чтобы окрасить ядра.

Центрифугируйте планшет, чтобы установить ячейки для точного измерения флуоресценции.

Под флуоресцентным микроскопом жизнеспособные Т-лимфоциты демонстрируют два флуоресцентных сигнала, соответствующих ядрам клеток и зеленым флуоресцентным белкам.

Усиленная зеленая флуоресценция свидетельствует об успешной стимуляции Т-лимфоцитов, в то время как слабый внутриклеточный си