Методика in vitro для изучения взаимодействия Т-клеток с поддерживаемыми планарными липидными бислоями

Возьмите проточную горку, содержащую поддерживаемый липидный бислой, или SLB.

SLB конъюгируется со специфическими лигандами — молекулой межклеточной адгезии 1 или ICAM-1 и анти-CD3 антителами — меченными флуорофорами.

Добавьте Т-клетки и меченный флуорофором анти-CD107a Fab — антигенсвязывающий фрагмент антитела против маркера дегрануляции.

Комплекс Т-клеточного рецептора-CD3 или TCR-CD3 связывается с анти-CD3 антителом, запуская TCR.

Индуцированная запуском передача сигналов изнутри наружу активирует интегрины на поверхности, которые связываются с иммобилизованным ICAM-1.

Конъюгация индуцирует перестройку цитоскелета — перестройку микротрубочек и полимеризацию актина, что приводит к латеральному распространению клетки по поверхности SLB.

Распространение позволяет большему количеству лиганд-рецепторных взаимодействий формировать супрамолекулярный активационный кластер или SMAC, создавая иммунный синапс.

Литические гранулы Т-клеток движутся по микротрубочкам и сливаются с плазматической мембраной, обнажая на поверхности клетки маркеры дегрануляции, которые связываются с анти-CD107a Fab.

С помощью флуоресцентного микроскопа визуализируйте иммунный синапс, обогащенный комплексами TCR-