Пептидная микрочиповая технология для профилирования специфичности антител

Возьмите предметное стекло микрочипа, содержащее пептиды гистонов с целевыми и нецелевыми посттрансляционными модификациями или ПТМ.

Пептиды иммобилизуются с помощью конъюгированного биотина в определенных местах на предметном стекле, функционализированном стрептавидином.

Пятна также содержат иммобилизованный зеленый флуорофор, конъюгированный с биотином, что облегчает идентификацию пятен.

Введите блокирующий буфер, предотвращающий взаимодействие неспецифических антител.

Снимите буфер и центрифугу, чтобы высушить предметное стекло.

Внутри воскового импринтера окаймите массив воском.

Уравновесьте массив с помощью буфера гибридизации.

Инкубируйте с первичными антителами, специфичными для целевой ПТМ.

Вводят красные флуорконъюгированные вторичные антитела, которые связываются с первичными антителами.

Удалите несвязанные антитела и центрифугой, чтобы высушить предметное стекло.

Сделайте изображение предметного стекла с помощью сканера с микрочипами. Зеленая флуоресценция помогает идентифицировать пятна, в то время как красная флуоресценция указывает на взаимодействие ПТМ и антител, демонстрируя специфичность антител.

Распознавание целевой ПТМ демонстрирует специфичность антител, в то в