Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:21 мин. • July 8th, 2025
Обрабатывайте прикрепленные плюрипотентные стволовые клетки человека сконструированными лентивирусами в реагенте для трансфекции.
Вирус несет гены устойчивости к антибиотикам и нейрогенный фактор транскрипции, контролируемый тетрациклин-чувствительными и регуляторными элементами.
Положительно заряженный реагент для трансфекции усиливает слияние вирусов и высвобождение их содержимого.
Вирусная РНК обратно транскрибируется в ДНК и интегрируется в ДНК стволовых клеток, обеспечивая экспрессию регуляторных элементов, которые продуцируют белки-активаторы.
Добавьте базальную среду с производным тетрациклина, которая образует комплекс с белками-активаторами.
Этот комплекс связывается с тетрациклин-чувствительным элементом, способствуя экспрессии генов и производя нейрогенные факторы транскрипции, которые индуцируют дифференцировку стволовых клеток в нейроны.
Добавьте базальную среду с антибиотическим препаратом для устранения нетрансфицированных клеток.
Обработайте клетки раствором для отслойки, содержащим протеолитические ферменты, которые разрушают внеклеточный матрикс или ВКМ и высвобождают клетки.
Удалите ферменты и повторно поместите клетки в лунки с покрытием ECM средой для созревани
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео