Визуализация и картирование нейронных путей в срезе миндалевидного тела

В мозге мыши миндалевидное тело содержит нейроны, которые образуют синаптические связи с медиальной префронтальной корой, или нейронами mPFC.

Возьмем срез миндалевидного тела, в котором нейроны mPFC экспрессируют светочувствительный канал родопсин, слитый с флуоресцентным белком.

Поместите срез в записывающую камеру и визуализируйте его под флуоресцентным микроскопом, чтобы найти нейроны mPFC.

Переключитесь на светлое поле и введите патч-пипетку, содержащую внутренний раствор.

Приложите положительное давление, чтобы продвинуть пипетку к нейрону миндалевидного тела.

При контакте с нейронами образуется ямочка.

Нанесите всасывание, чтобы сформировать плотное уплотнение.

Продолжайте отсасывание, чтобы разорвать мембрану, установив контакт с внутренней частью клетки.

Осветите срез, чтобы активировать нейрональный канал mPFC родопсин, запуская положительный приток ионов, генерацию потенциала действия и высвобождение нейротрансмиттеров.

Нейротрансмиттеры связываются с рецепторами нейронов постсинаптического миндалевидного тела, вызывая приток ионов и генерацию тока.

Запишите постсинаптический нейронный ток для анализа связи mPFC-миндалевидное тело.

Чтобы подготовить патч-микроскоп к оптог