גליקוליזה מתחילה עם מולקולת גלוקוז אחת. באמצעות ATP, האנזים הקסוקינאז מעביר קבוצת פוספט לסוכר בעל שישה פחמנים כדי לייצר גלוקוז-6-פוספט, אשר נלכד בתוך התא בשל מטענו השלילי. לאחר מכן, האנזים פוספוגלוקוז איזומראז מזרז את ההמרה של הפוספוגלוקוז לאחד האיזומרים שלו:פרוקטוז-6-פוספט.הפוספופרוקטוז יכול כעת לעבור זרחון על-ידי אנזים מגביל קצב, פוספופרוקטוקינאז, לייצור פרוקטוז 6, 1-ביספוספט. לבסוף, עם שתי קבוצות פוספט מצומדות, מולקולת הסוכר מבוקעת על-ידי אלדולאז לשני איזומרים בעלי שלושה פחמנים:גליצראלדהיד-3-פוספט, או G3P, ודיהידרוקסיאצטון-פוספט, DHAP. אנזים מזרז נוסף, טריוז פוספט איזומראז, ממיר את ה-DHAP ל-G3P כדי להניב שתי מולקולות.לפיכך, במהלך שלב השקעת האנרגיה הזה, משתמשים בסך הנטו של שני ATPs לפיצול מולקולת גלוקוז אחת לשני סוכרים קטנים יותר.