Zebrafish भ्रूण में mRNA और morpholino antisense oligonucleotides Microinjection.
Summary
Microinjection निषेचित zebrafish भ्रूण में विदेशी तत्वों को शुरू करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित और प्रभावी तरीका है. यहाँ, हम mRNA overexpression प्रदर्शन के लिए एक मजबूत microinjection तकनीक, और morpholino zebrafish में oligonucleotide जीन पछाड़ना अध्ययन प्रदर्शित करता है.
Abstract
विकास के दौरान एक जीन की भूमिका की जांच के लिए एक अनिवार्य उपकरण जीन पछाड़ना, overexpression, और misexpression अध्ययन करने की क्षमता है. (Zebrafish में<em> Danio rerio</em)> शाही सेना डीएनए, प्रोटीन, antisense oligonucleotides और अन्य छोटे अणुओं के विकासशील भ्रूण में microinjection शोधकर्ताओं जीन समारोह की खोज के लिए एक त्वरित और मजबूत परख प्रदान करता है<em> Vivo में</em>. इस वीडियो लेख में, हम प्रदर्शन करेंगे कैसे तैयार करने के लिए और microinject<em> इन विट्रो में</emसंश्लेषित> EGFP mRNA और translational अवरुद्ध morpholino oligo के खिलाफ<emPkd2></em> एक autosomal प्रमुख पॉलीसिस्टिक गुर्दा (ADPKD) एक सेल चरण zebrafish भ्रूण में रोग, के साथ जुड़े जीन. हम तो GFP अभिव्यक्ति और phenotype विश्लेषण की पुष्टि करने के द्वारा mRNA और morpholino microinjections की सफलता का विश्लेषण करेगा. इस तकनीक का ब्रॉड अनुप्रयोगों पैदा ट्रांसजेनिक जानवरों और रोगाणु लाइन chimeras, सेल भाग्य मानचित्रण और जीन स्क्रीनिंग शामिल है. इस के साथ साथ हम EGFP और पछाड़ना की overexpression के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन<emPkd2></em> MRNA और morpholino oligonucleotide इंजेक्शन के द्वारा.
Protocol
Discussion
Zebrafish भ्रूण में Microinjection विकास में एक विशेष जीन की भूमिका की खोज के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित और मजबूत तकनीक है. अनुप्रयोगों overexpression, misexpression, और के रूप में के रूप में अच्छी तरह से कई जीनों के बीच epistatic विश्लेषण के ह?…
Acknowledgements
यह काम ZS एनआईएच PKD और नींव द्वारा समर्थित किया गया था. सभी पशु प्रयोगों येल पशु संसाधन केंद्र (YARC) और संस्थागत पशु की देखभाल और प्रयोग करें समिति के दिशा निर्देशों (IACUC) के अनुसार आयोजित की गई.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1x E3 Medium | Reagent | 5 mM NaCl 0.17 mM KCl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 0.1% Methylene blue |
References
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