Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

فأري إجراء زراعة الكلى

doi: 10.3791/1150 Published: July 10, 2009

Summary

زرع الكلى في الفئران هو إجراء تحديا فنيا يتطلب الحذر بعد العمليات الجراحية الرعاية والعلاج للنجاح.

Abstract

زرع الكلى في الفئران مثلي هو إجراء تحديا تقنيا. على الرغم من إجراء عمليات زرع الكلى الأولى في الفئران عن طريق رسل آخرون أكثر من 30 سنة مضت (1) وصقلها عن طريق تشانغ وآخرون سنة في وقت لاحق (2) ، ويتقن عدد قليل من الناس في العالم هذا الإجراء. في المختبر لدينا أجرينا بنجاح عملية زرع الكلى مثلي 1200 مع معدل> البقاء على قيد الحياة 90 ٪. النقاط الرئيسية لتحقيق النجاح تشمل رقابة صارمة من ضخه النزيف والإصابة والتجلط ، سواء أثناء وبعد إجراء عمليات الزرع ، واستخدامها بدلا من 10-0 11-0 خياطة لanastomoses.

بعد العمليات الجراحية الرعاية والعلاج للمتلقي من المهم للغاية لنجاح زرع والتقييم. جميع المستفيدين طعم كلوي تلقي المضادات الحيوية في شكل حقنة من البنسلين مباشرة بعد الزرع وsulfatrim في مياه الشرب باستمرار. يتم تقييم شامل للصحة الحيوانية يوميا ويتم تنفيذ كل التحليلات الكرياتينين بالدم بشكل روتيني مع جهاز I - STAT المحمولة لتقييم وظيفة الكسب غير المشروع.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

حصاد الجهاز المانحة (2) :

  1. تخدير المانحة باستخدام 65mg/kg IP بنتوباربيتال ؛ الحفاظ التخدير بواسطة Isoflurane (2-3 ٪).
  2. جعل شق خط الوسط من القص إلى العانة لدخول البطن المانحة وفضح الكلية اليسرى عن طريق تحريك الأمعاء أفقيا إلى الجانب الأيمن.
  3. عزل الكلى التي خلفتها ligating وتقسيم السفن الكظرية والخصية مع خياطة الحرير 8-0.
  4. تعبئة الأبهر أعلاه التقائه الشريان الكلوي والوريد.
  5. تعبئة الوريد الأجوف السفلي (IVC) أعلاه ، وأدناه التقائه الشريان الكلوي والوريد.
  6. Ligate أدناه الأورطى الشريان والوريد الكلوي مع خياطة الحرير 8-0 للحد من النزيف.
  7. تشريح الحالب الأيسر من نقير الكلى إلى المثانة.
  8. كشف تقاطع حالبي مثاني باستخدام التراجع ذنبيا على القبة المثانة.
  9. صغير المكوس ، والتصحيح اهليلجيه المثانة تحتوي على مفترق اليسار الحالبي المثاني ، وتستخدم لإعادة الإعمار عن طريق البول مفاغرة المثانة إلى المثانة. لم يتم تضمين مع الحق الحالب والمثانة.
  10. Ligate في IVC تحت الشريان والوريد الكلوي مع خياطة الحرير 8-0.
  11. heparinized حل رينغر اكتات عبر الشريان الأورطي infrarenal Ligate الشريان الأورطي فوق الشريان والوريد الكلوي ، ويروي ببطء والكسب غير المشروع في الموقع مع 0.2 - 0.4ml الباردة.
  12. Ligate في IVC فوق الشريان والوريد الكلوي مع خياطة الحرير 8-0.
  13. المسح الشامل للالوريد الكلوي عند التقائه في IVC.
  14. تقسيم الأبهر مواربة ، 2mm وتقريبا دون الشريان الكلوي.
  15. إزالة الكلى والأوعية الدموية مع امداداتها الحالب تعلق على التصحيح المثانة ان التكتل. متجر في حل رينغر اكتات على الجليد.
  16. الموت ببطء الماوس الجهات المانحة عن طريق الخلع عنق الرحم تحت التخدير.

المستلم زرع (2) :

  1. تخدير المتلقي مع IP ملغم / كغم من 65 بنتوباربيتال والحفاظ على التخدير بواسطة Isoflurane (2-3 ٪).
  2. جعل شق خط الوسط ، وتغطي الأمعاء مع الشاش الرطب وسحب بعناية إلى الجانب الأيسر.
  3. Ligate الحالب الأيمن ، الشريان الكلوي والوريد ، وإزالة الكلية اليمنى.
  4. عزل بعناية وعبر المشبك ، والشريان الأورطي infrarenal IVC مع المشابك 4 ملم two microvasular بعد ligating فروع القطنية.
  5. مكان الدرز النايلون 10-0 من خلال سمك الكامل الأبهر وسحب لإجراء aortaotomy بيضاوي الشكل من قطع واحد (حوالي خمس القطر للسفينة).
  6. جعل فصد طولية بواسطة ثقب إبرة IVC مع قياس 30 و توسيع نطاق استخدام microscissors مناسب.
  7. ري كل من الشريان الأورطي وIVC مع المالحة heparinized لمسح الدم داخل اللمعة أو جلطات.
  8. إزالة الكلى المانحة من الجليد ووضعه داخل بطنيا في الجهة اليمنى من الفأرة. يتم الاحتفاظ الكلى المانحة الرطبة الباردة مع وسادة شاش غارقة في المياه المالحة.
  9. مكان الغرز اثنين في البقاء على قمة الدانية والقاصية من aortaotomy المتلقين مع الكفة الأبهر المانحين.
  10. جعل مفاغرة النهاية إلى جانب المانحين الكفة بين الشريان الأورطي والجدار الأمامي للaortaotomy المتلقين ، وذلك باستخدام 2 ~ 3 المستمر 10-0 خيوط النايلون في الخارج من الشريان الأورطي.
  11. بدوره الكسب غير المشروع الكلى المانحة الى الجهة اليسرى للمتلقي. كرر الإجراء السابق بين المانحين الكفة الأبهر والجدار الخلفي للمتلقي aortaotomy
  12. إجراء مفاغرة نهاية إلى الجانب بين الوريد الكلوي المانحة والجدار الخلفي للIVC المتلقين ، وذلك باستخدام 4-5 10-0 خيوط النايلون المستمر في داخل IVC. ومن ثم يتم إغلاق الجدار الأمامي من الوريد الكلوي IVC والجهات المانحة مع 4 5 ~ خيوط المستمر خارج IVC.
  13. يجب أن يتم الانتهاء من كل من مفاغرة الوريد والشريان في غضون 20 دقيقة.
  14. شطف الكسب غير المشروع مع عدة مرات المالحة الباردة خلال مفاغرة.
  15. تقسيم قبة المثانة المتلقي ، ووقف نزيف مع الكي.
  16. إجراء قطع صغيرة على القبة.
  17. مكان الغرز البقاء اثنين من النايلون ل10-0 anastomize المانحين التصحيح المثانة صغيرة مع القبة المثانة المتلقين. وتخاط كل جانب من مفاغرة مع 8 غرز 10 ~ مستمر.
  18. إغلاق البطن في طبقتين مع 4-0 العقيمة مستمرة ، خياطة امتصاص vicryl الاصطناعية.
  19. إعطاء الفئران المتلقي المالحة الدافئة 0.4ml أثناء الجراحة بواسطة الحقن الرابع على فترات متقطعة.

بعد العمليات الجراحية العناية مستلم

  1. بعد إغلاق البطن ، وتدار في حقنة واحدة من البنسلين في العضل (500U/10g) (2).
  2. بالإضافة إلى ذلك ، تتلقى المستلمين 0.05 ملغم / كغم البوبرينورفين عضليا على 0 اليوم آخر يوم والجراحة 1 للألم. بعد الجراحة ، والمتلقين زرع تلقي المياه التي تحتوي على sulfatrim (100mg/kg) حتى التجربة هي الشركة المصرية للاتصالاتrminated.
  3. ل24H الأولى هي حافظت الفئران بعد العمل الجراحي في درجة حرارة الحاضنة للرقابة.
  4. الفئران وعادة ما يشفى من التخدير في حدود 1 ساعة من العملية ، ويتم إعطاء الغذاء والمياه العادية بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية.
  5. يتم إزالة الخيوط الجراحية الجلد 2 أسابيع بعد الجراحة.

استئصال الكلية المستفيدة

  1. تخدير المتلقي 4 الكلى آخر ~ 7 أيام الزرع مع 65 ملغم / كغم IP بنتوباربيتال ؛ الحفاظ التخدير بواسطة Isoflurane (2-3 ٪).
  2. فتح البطن من خلال شق خط الوسط.
  3. تغطية الأمعاء مع غارقة في المياه المالحة والشاش ، ويتراجع بعناية إلى الجانب الأيمن.
  4. إزالة الكلية اليسرى بعد ligating اليسار الوريد حالب الكلى ، والشرايين.
  5. إغلاق البطن في طبقتين مع خياطة متواصلة امتصاص 4-0 vicryl الاصطناعية.

كلها قياسات الدم الكرياتينين

  1. تتم أسبوعيا لجمع الدم مرة كل أسبوعين من أقل من 0.2 سم submandibularly إما بدون تخدير أو الرجعية orbitally تحت التخدير Isoflurane.
  2. ويتم تحديد كمية الكرياتينين بالدم الكامل مستويات باستخدام محلل المحمولة I - ستات السريرية (Heska كورب ، وفورت كولينز ، أول أكسيد الكربون).
  3. يتم تحويل وحدات تقليدية (ملغم / دل) إلى وحدات SI للميكرومول / لتر بضرب الوحدات التقليدية بنسبة 88.4.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

لقد نفذنا ما يقرب من 1200 حالة لزرع الكلى في الفئران مع نسبة نجاح 90 ٪ من التقنية>. مقارنة زرع القلب ، ونسبة نجاح عمليات زرع الكلى منخفضة في العادة. ومع ذلك ، حافظت مختبرنا نسبة نجاح عالية (> 90 ٪) من زرع الكلى. النقاط الأساسية للنجاح هي للحد من إصابات الكلى ضخه إلى الجهات المانحة والمتلقية على حد سواء ، وتقليل النزف والتجلط في جميع أنحاء الداخلي والجراحة آخر. قد يكون للعوامل التالية أهمها : (أ) تقليل النزف في المتلقي أثناء الجراحة قدر الإمكان من خلال عملية دقيقة ورقيقة ، (ب) تقليل الحار مرات الدماغية وعبر لقط في أثناء إعداد الكلى المانحة والمتلقية الزرع ، (ج) استخدام المثانة المانحة الصغيرة التصحيح لمنع النخر ، وعدم كفاية إمدادات الدم تسرب البول في مرحلة ما بعد العملية ، (د) تأخير استئصال الكلية من الكلية الأم حتى 4 ~ 7 أيام بعد زرع الكلى للسماح للزرع لاسترداد الدالة التالية لعملية جراحية ، (ه ) أداء anastomoses (بين المانحين الكفة الأبهر والجدار الأمامي وبين الجهات المانحة الكفة الأبهر والجدار الخلفي للأبهر المستلم) خارج الأبهر للحد من حدوث تخثر ، (و) الحفاظ على الفئران المتلقي الدافئ لمدة لا تقل عن 24 ساعة بعد الجراحة ، (ز) إعطاء المضادات الحيوية على الفئران المتلقي بعد العملية لمنع العدوى المحتملة.

في هذا البروتوكول ، ونحن نستخدم بدلا من 10-0 11-0 خياطة دون التأثير على معدل البقاء على قيد الحياة. على الرغم من أن الدرز 11-0 مثالية واستخدامها في العديد من المختبرات الزرع ، ونحن نشعر بأن 10-0 خياطة كافية لاستخدامها في عمليات زرع الكلى طالما تسيطر عليها بشكل جيد للعوامل المذكورة أعلاه.

إزالة الكلى الأصلي المتبقي هو ضروري بحيث يمكن رصد هذا التراجع في وظيفة الكلى الكسب غير المشروع عن طريق قياس الكرياتينين في المصل. جميع المستفيدين طعم الخضوع لاستئصال الكلية من الكلى الكلى الأصلي اليسار في الفترة بين 4 و 7 زرع الكلى آخر أيام. لم يتم تنفيذ استئصال الكلية في وقت لزرع الكلى يعانون من المتلقين مميز اعتلال الصحة أو عدم البقاء على قيد الحياة عندما تتم كل الإجراءات في نفس الوقت. ويتخلف 4-7 اليوم بين إجراءات تصاريح الكسب غير المشروع الكلى للتعافي من اصابة في نقص تروية وضخه قبل إزالة الكلى الأصلي. ويتم تقييم وظائف الكلى الكسب غير المشروع من قبل الامتحانات اليومية للصحة الحيوانية عموما ومستويات الكرياتينين في الدم. للإشارة ، من غير زرع ، والماوس العادي لديه مستوى الكرياتينين من حوالي 20 ميكرومول / لتر. ويشتبه في الكلى عندما رفض الطعم الخيفي الماوس المتلقي يظهر عليها علامات المرض وارتفاع مستوى الكرياتينين قرب 100 ميكرومول / L التي يتم حصادها في وقت لترقيع التحليلات التشريحية المرضية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها وIACUC جامعة ولاية أوهايو.

Acknowledgments

ودعمت هذه الدراسات في جزء من التمويل من المعاهد الوطنية للصحة R01 AI36532 لجاه. نود أن نعترف بالدعم المتميز في علم الأمراض زرع المقدمة من الدكتور تيبور Nadasdy ، والتوجيه لا تقدر بثمن والبصيرة التي قدمها الراحل الدكتور شارل Orosz زاي في استهلال هذا الجهد البحثي.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
i-STAT Other HESKA Cat 5101
i-STAT Cartridge Other HESKA CAT 5110-CREA
Sulfatrim Other Actavis R02109
Isoflurane Other NOVAPLUS CA-0474
10-0 Suture Surgery Sharpoint AK0100

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants. JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).
  2. Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. Improved techniques for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 16, (2), 103-109 (1995).
فأري إجراء زراعة الكلى
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. Murine Renal Transplantation Procedure. J. Vis. Exp. (29), e1150, doi:10.3791/1150 (2009).More

Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. Murine Renal Transplantation Procedure. J. Vis. Exp. (29), e1150, doi:10.3791/1150 (2009).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter