قياس إيماس في الخلايا العصبية عن طريق وصفها وزير الخارجية
Summary
يمكن أن القدرة على قياس حركية الافراج حويصلة تساعد على توفير نظرة ثاقبة بعض أساسيات العصبي. المستخدمة هنا فإننا في الوقت الحقيقي التصوير من الحويصلات المسمى مع وزير الخارجية صبغ أحمر فلوري 4-64 لقياس معدل الافراج قبل المشبكي حويصلة في الثقافات العصبية الحصين.
Abstract
يمكن أن القدرة على قياس حركية الافراج حويصلة تساعد على توفير نظرة ثاقبة بعض أساسيات العصبي. المستخدمة هنا فإننا في الوقت الحقيقي التصوير من الحويصلات المسمى مع صبغة FM لرصد معدل الافراج قبل المشبكي حويصلة. FM4 – 64 هو صبغ أحمر فلوري amphiphilic styryl أن يضمن في أغشية الحويصلات متشابك كما هو حفز الإلتقام. التفاعلات محبة للدهون يؤدي إلى زيادة صبغ كثيرا في مضان مما يؤدي إلى انبعاث إشارة ساطعة عندما يرتبط مع حويصلات واحد عندما الاسمية في السائل خارج الخلية. يستخدم بعد خطوة للمساعدة على إزالة غسل الصبغة الخارجية داخل غشاء البلازما ، ويتركز وزير الخارجية المتبقية داخل الحويصلات وطرد بعد ذلك عندما يتم بفعل إيماس جولة أخرى من التحفيز الكهربائي. يقاس معدل الإفراج الحويصلات الناتجة عن انخفاض في مضان. منذ يمكن تطبيقها FM الصبغة الخارجية وعابر ، بل هو أداة مفيدة لتحديد معدلات إيماس الثقافات في الخلايا العصبية ، وخصوصا عندما تقارن بين معدلات ونقاط الاشتباك العصبي transfected حبات السيطرة المجاورة.
Protocol
Discussion
وإمكانات العمل 300 (APS) كافية لإحداث ما لا يقل عن جولة واحدة من إعادة تدوير الحويصلة ، حافزا التحميل من 300 نقاط وصول ، أو تعطى غالبا ما تكون أكثر لتسمية تجمع تدوير الحويصلات. على الرغم من المحفزات تحميل أكثر كثافة ، مثل 900 كالة الأنباء الجزائرية ، قد تسمح لعدد رمزي من الحويصلات إضافي?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| APV | Sigma | A5282 | ||
| FM 4-64 | Molecular Probes | T-3166 | ||
| CNQX disodium salt | Sigma | C-239 |
References
- Betz, W. J., Bewick, G. S. Optical analysis of synaptic vesicle recycling at the frog neuromuscular junction. Science. 255, 200-203 (1992).
