囊泡释放动力学的能力来衡量,可以帮助提供洞察到一些神经递质的基础。在这里,我们采用实时成像与红色荧光染料FM 4-64标记,以测量在海马神经元的文化突触前囊泡释放率的囊泡。
囊泡释放动力学的能力来衡量,可以帮助提供洞察到一些神经递质的基础。在这里,我们使用实时成像与FM染料标记,以监测囊泡突触前囊泡释放率。 FM4 – 64是一个红色的荧光双亲苯乙烯染料嵌入到突触小泡的膜,内吞作用是刺激。亲脂相互作用导致的染料,大大提高了荧光,从而散发出耀眼的的信号时,囊泡和的名义,在细胞外液时相关。经过清洗的步骤是用来帮助去除质膜的内外部染料,其余的FM是集中在囊泡,然后被驱逐又一轮的电刺激诱导的胞外分泌时。囊泡释放率是测量荧光的产生减少。由于调频染料可以适用于外部和瞬时,它是一个有用的工具,用于确定在神经元文化的胞外分泌率,尤其是在比较之间转突触和相邻的控制boutons率。
300动作电位(AP)的是足以诱发囊泡循环至少有一个全面,装载了300接入点或更是经常给标签的囊泡回收池刺激。虽然更加激烈负荷刺激,如900的AP,可能会允许必须标明的其他囊泡的名义,这也增加了染料可以嵌入外膜的时间,从而导致更多的非特异性染色。我已经找到了清洗步骤是至关重要的,以确保正确的脱色。重要的是要灌注流速为每分钟1至1.5毫升,一般为10 + 2分钟。 〜7分钟后洗净,监察染料去?…
The authors have nothing to disclose.