Primat beynin anatomik organizasyonu, insanlarda normal ve patolojik durumları önemli bilgiler sağlayabilir. Hakkında tarafsız stereology, doğru ve etkin bir biçimde, belirli bir referans alanı toplam nöron numarası (veya başka bir hücre tipi) tahmin etmek için bir yöntemdir<sup> 1</sup>.
Abstract
Insan dışı primat normal insan beyninin fonksiyonu ve hastalık süreçleri anlamak için önemli bir translasyonel türüdür. Hakkında tarafsız stereology, doku bölümlerde biyolojik nesnelerin ölçümü için state-of-the-art olarak kabul edilen yöntem<sup> 2</sup> Memeli beyindeki biyolojik özellikleri için güvenilir yapısal veri oluşturur<sup> 3</sup>. Bu yaklaşımın anahtar bileşenleri tarafsız içinde hücre sayıları ve boyutu, lif ve kılcal uzunlukları, yüzey alanları, bölgesel hacimleri ve mekansal dağılımları, biyolojik nesnelerin ölçümü ile birlikte anatomik olarak tanımlanmış yapılar (referans alanlarda), (sistematik-random) örnekleme referans alan<sup> 4</sup>. Önceki yöntemlerine göre bu stereolojik yaklaşımlar avantajları arasında hatalı varsayımlar ve doğrulanabilir olmayan modeller kaynaklanan sistematik (non-random) hata bilinen tüm kaynakları kaçınma. Bu çalışmada, bilgisayarlı stereology (vervet maymun beynin frontal korteks nöronal toplam nüfusun tahmin etmek için biyolojik bir başvuru belgeleri<em> Chlorocebus aethiops sabeus</em>), Iki piyasada bulunan stereology programları, BioQuant Yaşam Bilimleri ve Stereologer (Şekil 1) yardımı ile. Kontrast ve hem de BioQuant sonuçların karşılaştırılması ve ek olarak<em> Stereologer</em> Sistemleri, bu çalışma için ayrıntılı bir protokol sağlar<em> Stereologer</em> Sistem.
Protocol
Bölüm 1: Ön-işleme doku Burke ve ark göre yapılmalıdır. (2009) 5 Kısaca, doku paraformaldehid, glutaraldehid, ya da formalin ile perfüze olması gerekir. Bu, genellikle diğer organlarda hasat için kullanılan standart transcardial perfüzyon yoluyla elde edilebilir. Bu çalışmada bu konuda derin sodyum pentobarbital (25 mg / kg, iv), aşırı dozda ötenazi ketamin hidroklorür (10 mg / kg, im), sedasyon ve tamamen exsanguinated kadar 0.1 M PBS ile transcardially perfüze. Bu 5 dakika…
Discussion
Primat beyin hakkında tarafsız stereology diğer biyolojik örneklerin benzer. Bununla birlikte, 50μm az dilimlenmiş vervet maymun tek bir yarımkürede 1200'den fazla bölüm verir primat beynin büyüklüğü göz önüne alındığında, dikkatli bir işleme planı önerilir. Öncelikle stereotaxically 1cm blokları, blok ve konular arasındaki bölümün standart bir düzlemde sağlar bloklar arasında kısmi bölümleri en aza indirir ve yönetilebilir büyüklükte bloklar 5 sağlar beynin engel…
Acknowledgements
Yazarlar Ikiel Ptito onun devam eden teknik destek için teşekkür etmek istiyorum. MP NSERC hibe.
Burke, M., Zangenehpour, S., Mouton, P. R., Ptito, M. Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain. J. Vis. Exp. (27), e1262, doi:10.3791/1262 (2009).