Maus Brustepithelzellen Form Mammospheres Während lactogenic Differenzierung

Summary

HC11 lactogenic Differenzierung kann durch die Bildung von Kuppelbauten genannt mammospheres charakterisiert werden. Die Strukturen können durch Phasenkontrast-Mikroskopie aufgezählt werden, um bei der Quantifizierung lactogenic Differenzierung zu unterstützen.

Abstract

Eine phänotypische Maßnahme häufig verwendet, um den Grad der Differenzierung in lactogenic Maus Brustepithelzellen Zellkulturen zu bestimmen, ist die Bildung von kuppelförmigen Zellstrukturen genannt mammospheres¹. Die HC11-Zelllinie wurde als Modellsystem für die Untersuchung der Regulation der Brustdrüse lactogenic Differenzierung beide berufstätig<em> In-vitro-</em> Und<em> In vivo</em². Die HC11 Zellen differenzieren und zu synthetisieren Milchproteine ​​in Reaktion auf die Behandlung mit lactogenic Hormone. Nach dem Wachstum der HC11 Maus Brustepithelzellen zur Konfluenz wurde lactogenic Differenzierung durch die Zugabe einer Kombination von lactogenic Hormone einschließlich Dexamethason, Insulin und Prolaktin induziert, die so genannte DIP. Die HC11 Zellen induziert zu unterscheiden waren zeitweise bis zu 120 Stunden nach der Induktion der Differenzierung und die Anzahl der mammospheres, dass in jeder Kultur erschienen war aufgezählt fotografiert. Die Größe der einzelnen mammospheres korreliert mit dem Grad der Differenzierung und das ist in den Bildern der differenzierenden Zellen dargestellt.

Protocol

Die HC11 Zellen wurden bis zur Konfluenz für 6 Tage in RPMI 1640 Medium mit 10% fötalem Kälberserum, 5μg/ml Insulin, 10 mM HEPES, 10ng/ml epidermal growth factor (EGF), um Kompetenz zu etablieren ergänzt gewachsen. Die Zellen wurden mit PBS gewaschen und gepflegt in Nährmedien ohne EGF für 24 Stunden. Zur Induktion lactogenic Differenzierung wurden die Zellen bei der Differenzierung Medien, dh RPMI mit Dexamethason (10 -6 M), Insulin (5 ug / ml) und Prolaktin (5 ug / ml) genannt DIP inkubiert. </li…

Discussion

Um für diese Technik erfolgreich zu sein und von bester Qualität, die Epithelzellen sind bei Konfluenz gehalten werden, bevor die mit lactogenic Hormone induziert. Es kann Situationen geben, wo es zahlreiche mammospheres, die die Quantifizierung erschwert werden. So quantitative Zwecke ist es am besten, die mammospheres zu einem Zeitpunkt fotografieren, wenn die Zahl der mammospheres kann gezählt werden.

Zwar gibt es verschiedene molekulare Marker verwendet werden, um den Grad der Differe…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
RPMI		Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum		Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine		Gibco	25030
PenStrep		Gibco	15140
Hepes		Quality Biologicals	118089060
EGF		Sigma	E9644
Insulin		Gibco	12585-014
Dexamethasone		Sigma	D1756
Microscope		Olympus	IX71
Digital Camera		QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394