Mus bröst epitelceller formen Mammospheres Under Lactogenic Differentiering

Summary

HC11 lactogenic differentiering kan karakteriseras genom bildandet av välvda strukturer som kallas mammospheres. Strukturerna kan räknas upp faskontrast mikroskopi till stöd i kvantifiera lactogenic differentiering.

Abstract

En fenotypiska mått används ofta för att bestämma graden av lactogenic differentiering i mus bröst epitelceller kulturer är bildandet av kupolformade cellstrukturer kallas mammospheres¹. Den HC11 cellinje har varit anställd som ett modellsystem för att studera regleringen av bröst lactogenic differentiering både<em> In vitro</em> Och<em> In vivo</em². Den HC11 cellerna differentiera och syntetisera mjölkprotein som svar på behandling med lactogenic hormoner. Efter ökningen av HC11 mus bröst epitelceller till sammanflödet var lactogenic differentiering framkallade genom tillsats av en kombination av lactogenic hormoner inklusive dexametason, insulin och prolaktin, kallad DIP. Den HC11 celler förmås att skilja fotograferades tidvis upp till 120 timmar efter induktion av differentiering och antalet mammospheres som dök upp i varje kultur räknades. Storleken på de enskilda mammospheres korrelerar med graden av differentiering och detta skildras i bilderna av de differentierande celler.

Protocol

Den HC11 cellerna odlades till sammanflödet i 6 dagar i RPMI 1640 mediet kompletteras med 10% fetalt kalvserum, 5μg/ml Insulin, 10 mm HEPES, 10ng/ml epidermal tillväxtfaktor (EGF) för att upprätta kompetens. Cellerna tvättas med PBS och underhållas i tillväxt media utan fonden i 24 timmar. Att förmå lactogenic differentiering cellerna inkuberades i differentiering media, dvs RPMI med dexametason (10 -6 M), insulin (5 mikrogram / ​​ml) och prolaktin (5 mikrogram / ​​ml) kallas DIP. <…

Discussion

För att denna teknik för att vara framgångsrika och av bästa kvalitet, måste epitelceller hållas på sammanflödet innan de framkallas med lactogenic hormoner. Det kan finnas situationer där det finns många mammospheres, vilket gör kvantifieringen svår. Således, för kvantitativ ändamål det är bäst att fotografera mammospheres vid en tidpunkt då antalet mammospheres kan räknas.

Även om det finns olika molekylära markörer används för att bestämma graden av lactogenic di…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
RPMI		Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum		Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine		Gibco	25030
PenStrep		Gibco	15140
Hepes		Quality Biologicals	118089060
EGF		Sigma	E9644
Insulin		Gibco	12585-014
Dexamethasone		Sigma	D1756
Microscope		Olympus	IX71
Digital Camera		QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394