पूरे रहनुमा मस्तिष्क भर में लक्ष्य प्रोटीन की बड़े पैमाने पर immunodetection उपन्यास ऊतक रोजगार एम्बेडिंग और एक निश्चित समय पर एकाधिक मुक्त अस्थायी वर्गों के बैच धुंधला के लिए रचनात्मक उपकरण के उपयोग के साथ संयुक्त तरीकों सेक्शनिंग द्वारा ही संभव है.
Abstract
Immunohistochemistry (आईएचसी) लक्ष्य प्रोटीन का पता लगाने के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल प्रयोगशाला तकनीकों में से एक है<em> बगल में</em>. पूरे मस्तिष्क भर में एक लक्ष्य प्रोटीन की अभिव्यक्ति पैटर्न से संबंधित प्रश्न अपेक्षाकृत आसान जवाब जब कृन्तकों की उन जैसे छोटे दिमाग में आईएचसी का उपयोग कर रहे हैं. हालांकि, primates के उन जैसे बड़े और जटिल दिमाग में एक ही सवाल का जवाब चुनौतियों का एक संख्या प्रस्तुत करता है. यहाँ हम एक वयस्क बंदर के दिमाग में एक लक्ष्य प्रोटीन की immunodetection लिए एक व्यवस्थित दृष्टिकोण प्रस्तुत करते हैं. इस दृष्टिकोण एम्बेडिंग और सेक्शनिंग न्यूरोसाइंस एसोसिएट्स की पद्धति (एनएसए) के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मुक्त अस्थायी वर्गों के बैच धुंधला के लिए विशेष रूप से विकसित उपकरणों के ऊतकों पर निर्भर करता है. यह वर्गों का एक सेट है, जो एक विशेष अंतराल पर पूरे मस्तिष्क का प्रतिनिधित्व करता है की वर्दी धुंधला में परिणाम है. परिणामस्वरूप दाग वर्गों विश्लेषणात्मक प्रक्रियाओं की एक विस्तृत विविधता के अधीन किया जा सकता है क्रम में करने के लिए प्रोटीन का स्तर, एक निश्चित प्रोटीन व्यक्त न्यूरॉन्स की आबादी को मापने.
Protocol
Immunohistochemisty विभिन्न प्रयोगात्मक पशु मॉडल के मस्तिष्क में प्रोटीन अभिव्यक्ति निस्र्पक के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया तकनीकों का है. यह अपेक्षाकृत आसान है करने के लिए इसी तरह की मस्तिष्क के आकार क?…
Discussion
इस प्रक्रिया में दो महत्वपूर्ण कदम है कि एक पूरे बंदर संभव मस्तिष्क में बड़े पैमाने पर प्रोटीन का पता लगाने के हैं. एक एम्बेड और सेक्शनिंग प्रोटोकॉल, जो एनएसए के स्वामित्व ज्ञान रहता है. अन्य धुंधला व्?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम फ्रैंक Ervin, रोबर्टा Palmour और व्यवहार विज्ञान फाउंडेशन हमारे रहनुमा काम के अपने निरंतर समर्थन के लिए, वेस्ट इंडीज, सेंट किट्स में स्थित प्रयोगशालाओं के कर्मचारियों के लिए आभारी हैं. स्वास्थ्य अनुसंधान (एसी) और राष्ट्रीय इंजीनियरिंग और अनुसंधान परिषद के कनाडा (सांसद) की कनाडा के संस्थानों से ऑपरेटिंग अनुदान – यह काम नाजुक एक्स कनाडा की रिसर्च फाउंडेशन (FXRFC) SZ करने के लिए और से एक फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था.
Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain. J. Vis. Exp. (29), e1286, doi:10.3791/1286 (2009).