전체 몽키 브레인에서 대규모 단백질 탐지에 대한 배치 Immunostaining
Summary
전체 영장류 두뇌를 통해 대상 단백질의 대규모 면역이 포함 소설 조직을 고용하고 주어진 시간에 여러 자유 부동 섹션의 배치 얼룩을위한 창조적인 장치를 이용하여 결합 방법을 sectioning에서 가능합니다.
Abstract
Immunohistochemistry (IHC)는 대상 단백질의 검출에 가장 널리 사용되는 실험 기법 중 하나입니다<em> 현장에서</em>. 전체 두뇌를 통해 대상 단백질의 표현 패턴에 관한 질문은 설치류의 것과 작은 두뇌에 IHC를 사용하는 경우 답변을 상대적으로 쉽습니다. 그러나, 영장류의 것과 같은 대규모 뒤얽힌 두뇌에서 같은 질문에 대답하는 것은 도전의 번호를 보여줍니다. 여기서 우리는 어른 원숭이 두뇌의 대상 단백질의 면역을위한 체계적인 접근법을 제시한다. 이 방법은 신경 과학의 방법론 어소 (NSA)뿐만 아니라 자유 부동 섹션의 배치 얼룩을 위해 특별히 개발된 도구를 포함하고 sectioning 조직에 의존합니다. 그것은 특정 간격으로, 전체 두뇌를 대표하는, 섹션의 집합의 유니폼을 얼룩을 초래합니다. 그 결과 얼룩진 부분은 단백질 수준, 특정 단백질을 표현 뉴런의 인구를 측정하기 위해 분석 절차의 다양한 받게 수 있습니다.
Protocol
Discussion
가능한 전체 원숭이의 뇌에 단백질의 대규모 감지하게이 절차에서 두 중요한 단계가 있습니다. 하나는 NSA의 독점적인 지식 남아 삽입과 sectioning 프로토콜입니다. 다른 하나는 HistoTools에서 제공하는 얼룩 요리와 바구니를 사용하는 것입니다. 후자는 주어진 시간에 많은 (~ 40) 섹션을 쉽고 빠르게 처리하실 수 있습니다. 또한 균일하게 뇌 전체 부분을 치료를위한 수단을 제공하고 과학적으로 소리 h…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 프랭크 에르빈, 로버타 Palmour 및 영장류 작품들의 지속적인 지원 세인트 키츠, 서인도 제도에있는 Behavioural 과학 재단 연구소의 직원에게 감사하고 있습니다. 보건 연구 (AC)과 국립 공학 및 캐나다 (MP)의 연구위원회의 캐나다 연구소에서 운영 보조금 -이 작품은 깨지기 쉬운 X 리서치 SZ 캐나다의 재단 (FXRFC)와의 화목에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| anti-FMRP monoclonal antibody | Chemicon | MAB2160 | Requires antigen retrieval in fixed tissue. | |
| anti-NeuN monoclonal antibody | Chemicon | MAB377 | N/A | |
| anti-Neurofilament H monoclonal antibody | Sternberger Monoclonals Inc. | SMI32 | N/A | |
| Antigen Unmasking Solution | Vector Laboratories | H-3300 | N/A | |
| Normal horse serum | Invitrogen | 16050122 | 500 mL | |
| Biotinylated Anti-Mouse IgG (H+L), made in horse | Vector Laboratories | BA-2000 | ||
| VECTASTAIN ABC Kit (Standard) | Vector Laboratories | PK-4000 | 1.5 mg | |
| Staining dish for floating sections | HistoTools | 10009 | 12 x 65 mm | |
| Staining transport basket | HistoTools | 10012 | large (fits 12 x 65 mm dish) |
|
| Triton X-100 | Fisher Scientific | P8514B | N/A | |
| DAB | Fisher Scientific | AC11209-0050 | N/A |
References
- Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. . Guide to the Care and Use of Experimental Animals. , (1993).
- Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragile X premutation. Nat Genet. 4, 335-340 (1993).
- Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates. Development. 116, 201-211 (1992).
- Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ. Proc Natl Acad Sci U S A. 80, 6126-6130 (1983).
