Summary

全モンキー脳の大規模なタンパク質の検出のためのバッチの免疫染色

Published: July 27, 2009
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Summary

全体の霊長類の脳で標的タンパク質の大規模な免疫検出は、任意の時点で複数のフリーフローティングセクションのバッチ染色のための創造的な装置の使用を組み合わせる方法を埋め込み、セクションなどの新たな組織を採用することで可能です。

Abstract

免疫組織化学(IHC)は、標的タンパク質の検出のための最も広く使用されている実験手法の一つです。<em>その場で</em>。脳全体にわたる標的タンパク質の発現パターンに関する質問は、このようなげっ歯類のものなどの小さな脳でIHCを使用するときに答えることが比較的容易である。しかし、そのような霊長類のものとして大規模かつ複雑な脳の同じ質問に、答えることは多くの課題を提示。ここでは、成人のサルの脳内の標的タンパク質の免疫検出のための体系的なアプローチを提示する。このアプローチは、神経科学アソシエイツ(NSA)と同様に自由に浮遊切片のバッチ染色のために特別に開発されたツールの方法論を埋め込み、セクションなどの組織に依存しています。それは特定の間隔で、脳全体を表す、セクションの集合の一様な染色をもたらす。結果として染色した切片は、特定のタンパク質を発現するニューロンの人口、タンパク質レベルを測定するために分析的手続の多種多様に供することができる。

Protocol

Immunohistochemistyは、様々な実験動物モデルの脳内におけるタンパク質発現を特徴づけるための最も広く使用されている技術の一つです。同様の脳の大きさを持つ齧歯類や他の一般的な実験モデルの脳で体系的免疫組織化学的手続を実施するのは比較的簡単です。しかし、全体のサルの脳でそのような免疫検出の手順を実行する方法の包括的な報告を提供する我々の知識への公開作品はありま?…

Discussion

可能な限り全体のサルの脳内のタンパク質の大規模な検出を行うこの手順の2つの重要なステップがあります。一つは、NSAの独自の知識のまま埋め込むとセクショニングのプロトコルです。他はHistoToolsで提供される染色料理やバスケットを使用することです。後者は、所定の時間に多くの(〜40)のセクションの容易かつ迅速な処理を行うことができます。また、一様に脳全体のすべてのセク…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

私たちは、霊長類の仕事の継続的なサポートのために、フランクエルヴィン、ロバータパーマー、セントキッツ、西インド諸島に位置する行動科学財団研究所のスタッフに感謝しています。ヘルスリサーチ(AC)とナショナルエンジニアリングとカナダの研究評議会(MP)のカナダの協会からオペレーティング助成金 – この作品は、カナダの脆弱X研究財団(FXRFC)からSZの親睦とによってサポートされていました。

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
anti-FMRP monoclonal antibody   Chemicon MAB2160 Requires antigen retrieval in fixed tissue.
anti-NeuN monoclonal antibody   Chemicon MAB377 N/A
anti-Neurofilament H monoclonal antibody   Sternberger Monoclonals Inc. SMI32 N/A
Antigen Unmasking Solution   Vector Laboratories H-3300 N/A
Normal horse serum   Invitrogen 16050122 500 mL
Biotinylated Anti-Mouse IgG (H+L), made in horse   Vector Laboratories BA-2000  
VECTASTAIN ABC Kit (Standard)   Vector Laboratories PK-4000 1.5 mg
Staining dish for floating sections   HistoTools 10009 12 x 65 mm
Staining transport basket   HistoTools 10012 large
(fits 12 x 65 mm dish)
Triton X-100   Fisher Scientific P8514B N/A
DAB   Fisher Scientific AC11209-0050 N/A

References

  1. Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. . Guide to the Care and Use of Experimental Animals. , (1993).
  2. Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragile X premutation. Nat Genet. 4, 335-340 (1993).
  3. Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates. Development. 116, 201-211 (1992).
  4. Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ. Proc Natl Acad Sci U S A. 80, 6126-6130 (1983).

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Cite This Article
Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain. J. Vis. Exp. (29), e1286, doi:10.3791/1286 (2009).

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