全モンキー脳の大規模なタンパク質の検出のためのバッチの免疫染色
Summary
全体の霊長類の脳で標的タンパク質の大規模な免疫検出は、任意の時点で複数のフリーフローティングセクションのバッチ染色のための創造的な装置の使用を組み合わせる方法を埋め込み、セクションなどの新たな組織を採用することで可能です。
Abstract
免疫組織化学（IHC）は、標的タンパク質の検出のための最も広く使用されている実験手法の一つです。<em>その場で</em>。脳全体にわたる標的タンパク質の発現パターンに関する質問は、このようなげっ歯類のものなどの小さな脳でIHCを使用するときに答えることが比較的容易である。しかし、そのような霊長類のものとして大規模かつ複雑な脳の同じ質問に、答えることは多くの課題を提示。ここでは、成人のサルの脳内の標的タンパク質の免疫検出のための体系的なアプローチを提示する。このアプローチは、神経科学アソシエイツ（NSA）と同様に自由に浮遊切片のバッチ染色のために特別に開発されたツールの方法論を埋め込み、セクションなどの組織に依存しています。それは特定の間隔で、脳全体を表す、セクションの集合の一様な染色をもたらす。結果として染色した切片は、特定のタンパク質を発現するニューロンの人口、タンパク質レベルを測定するために分析的手続の多種多様に供することができる。
Protocol
Discussion
可能な限り全体のサルの脳内のタンパク質の大規模な検出を行うこの手順の2つの重要なステップがあります。一つは、NSAの独自の知識のまま埋め込むとセクショニングのプロトコルです。他はHistoToolsで提供される染色料理やバスケットを使用することです。後者は、所定の時間に多くの（〜40）のセクションの容易かつ迅速な処理を行うことができます。また、一様に脳全体のすべてのセク…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちは、霊長類の仕事の継続的なサポートのために、フランクエルヴィン、ロバータパーマー、セントキッツ、西インド諸島に位置する行動科学財団研究所のスタッフに感謝しています。ヘルスリサーチ（AC）とナショナルエンジニアリングとカナダの研究評議会（MP）のカナダの協会からオペレーティング助成金 – この作品は、カナダの脆弱X研究財団（FXRFC）からSZの親睦とによってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| anti-FMRP monoclonal antibody | Chemicon | MAB2160 | Requires antigen retrieval in fixed tissue. | |
| anti-NeuN monoclonal antibody | Chemicon | MAB377 | N/A | |
| anti-Neurofilament H monoclonal antibody | Sternberger Monoclonals Inc. | SMI32 | N/A | |
| Antigen Unmasking Solution | Vector Laboratories | H-3300 | N/A | |
| Normal horse serum | Invitrogen | 16050122 | 500 mL | |
| Biotinylated Anti-Mouse IgG (H+L), made in horse | Vector Laboratories | BA-2000 | ||
| VECTASTAIN ABC Kit (Standard) | Vector Laboratories | PK-4000 | 1.5 mg | |
| Staining dish for floating sections | HistoTools | 10009 | 12 x 65 mm | |
| Staining transport basket | HistoTools | 10012 | large (fits 12 x 65 mm dish) |
|
| Triton X-100 | Fisher Scientific | P8514B | N/A | |
| DAB | Fisher Scientific | AC11209-0050 | N/A |
References
- Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. . Guide to the Care and Use of Experimental Animals. , (1993).
- Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragile X premutation. Nat Genet. 4, 335-340 (1993).
- Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates. Development. 116, 201-211 (1992).
- Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ. Proc Natl Acad Sci U S A. 80, 6126-6130 (1983).
