Elektrofysiologiska inspelningar från<em> Drosophila</em> Embryon gör analyser för att utveckla muskler och neuron elektriska egenskaper, samt karaktärisering av funktionella synaptogenesis på glutamaterg neuromuskulära förbindelsen och centrala kolinerga och GABAergic synapser.
Drosophila är en förstklassig genetisk modell för studier av såväl embryonal utveckling och funktionell neurovetenskap. Tidigare har dessa fält helt isolerade från varandra, med i stort sett oberoende historia och vetenskapliga samfund. Dock är gränssnittet mellan dessa oftast skilda områden utvecklingsarbetet program som ligger bakom förvärvet av funktionella elektriska signalering egenskaper och differentiering av funktionella kemiska synapser under de sista faserna av neural krets bildas. Detta gränssnitt är ett mycket viktigt område för utredning. I Drosophila, dessa faser av funktionell utveckling sker under en period av <8 timmar (vid 25 ° C) under den sista tredjedelen av fosterutvecklingen. Denna sena utveckling period ansågs länge svårlösta för undersökning på grund av deponering av en tuff och tät yta epidermal nagelband. Ett genombrott förskott var tillämpningen av vatten-polymerisation kirurgiskt lim som kan vara lokalt tillämpas på nagelbanden för att kontrollerad dissekering av sena embryon. Med ett rygg-längsgående snitt, kan embryot läggas platt, utsätta den ventrala nerven sladden och kropp vägg muskulatur till experimentella undersökningar. Hela-cell patch-clamp teknik kan sedan användas för att spela in från individuellt identifierbara nervceller och somatiska muskler. Dessa inspelning konfigurationer har använts för att spåra utseende och mognad av joniska strömmar och aktionspotential utbredning i både nervceller och muskler. Genetiska mutationer som påverkar dessa elektriska egenskaper har präglats för att avslöja den molekylära sammansättningen av jonkanaler och tillhörande signalering komplex, och att börja utforska de molekylära mekanismerna av funktionella differentiering. Särskilt fokus har varit montering av synapsförbindelser, både i det centrala nervsystemet och periferi. Den glutamaterg neuromuskulära förbindelsen (NMJ) är mest tillgänglig för en kombination av optisk avbildning och elektrofysiologiska inspelning. Ett glas sug elektrod används för att stimulera de perifera nerver, med excitatoriska trafikplats ström (EJC) inspelningar i spännings spänns-muskler. Denna inspelning konfiguration har använts för att kartlägga funktionella differentiering av synapsen, och spåra utseende och mognaden av presynaptiska fastigheter glutamat release. Dessutom kan postsynaptiska egenskaper analyseras oberoende via jontoforetiskt eller tryck tillämpning av glutamat direkt till muskeln ytan, för att mäta utseende och mognaden av glutamat receptorn fält. Således kan både pre-och postsynaptiska element övervakas separat eller i kombination under embryonala synaptogenesis. Detta system har varit starkt användas för att isolera och karakterisera genetiska mutanter som försämrar embryonala synaps bildning, och därmed avslöjar de molekylära mekanismer som styr specifikation och differentiering av synaps anslutningar och funktionella synaptisk signalering egenskaper.
Elektrofysiologiska inspelning från Drosophila embryon kräver manuell manipulation och dissektion. Hälsa förberedelser, och därmed kvaliteten på inspelningarna, beror på en att snabbt kunna och prydligt förbereda den ömtåliga embryonala vävnader för inspelning, och sedan köra experimentet. Praktiker bör ha goda kunskaper i både embryonala dissektioner och patch clamp elektrofysiologi innan du försöker att ta itu med båda samtidigt.
Inspelningar kan göras på en av…
The authors have nothing to disclose.
KB stöds av NIH bidrag GM54544.