Использование Подкова Краб, Limulus Полифема, В Vision Research

Summary

В этом видео мы выполняем электроретинограмму записи оптических записи нерва и intraretinal записи с американской подковы краба, Limulus Полифема. Эти электрофизиологические парадигм могут быть использованы для исследования нейронных основе видения в исследования или обучения лаборатории.

Abstract

Американская подковы краба, Limulus Полифема является одним из старейших существ на земле, и животное продолжает играть незаменимую роль в биомедицинских исследованиях. Мало того, что их крови содержатся особые клетки, которые ученые используют для обнаружения bacteriotoxins в наших лекарств, но их глаза также содержат нейронной сети, которая обеспечила гораздо представление о физиологических процессах, работающих в нашей зрительной системы, такие, как адаптация к свету и бокового торможения. Подковы краба остается привлекательной моделью для зрения исследований, поскольку животное большое и выносливым для беспозвоночных, его нейронов сетчатки большие и легко доступным, его зрительная система компактна и хорошо изучен, и его визуальное поведение определено корректно. Кроме того, структура и функции глаза модулируются на ежедневной основе циркадных часов в мозге животных с. Короче говоря, зрительной системы мечехвостов достаточно прост для понимания еще достаточно сложными, чтобы быть интересным.

В этом видео мы представляем три парадигмы электрофизиологические исследования нейронных основе видения, которые могут быть выполнены в естественных условиях с Limulus. Они электроретинограмму записи оптических записи нерва и intraretinal записи. Электроретинограмму (ERG) записи меру с поверхности электрода подвел электрический ответ все ячейки в глаза на вспышку света. Они могут быть использованы для мониторинга общей чувствительности глаза для продления периода времени. Оптический нерв записи мера пики активности одиночных нервных волокон с внеклеточным электродом microsuction. Они могут быть использованы для изучения визуальные сообщения передаются от глаза к мозгу, а также циркадные часы-сообщения обратную от мозга к глазу. Intraretinal мера записей с внутриклеточной микроэлектрода колебаний напряжения индуцированного светом в отдельных клетках глаза. Они могут быть использованы для выяснения клеточных механизмов сетчатки обработки.

Protocol

Часть 1: экспериментальная подготовка

Экспериментальные процедур, выполняемых на мечехвостов были одобрены Институциональные уходу и использованию животных комитета в Бостонском университете. Животные закупаются у морской биологический Labs (Woods Hole, штат Массачусетс) или в других аналогичных и размещены в газированных танк морской в ​​комнате подвергается регулируется свет-темнота цикла. Режим освещения имеет большое значение для увлекая циркадных часов краба и велосипедных глаз ежедневно между дневной и ночной государств. Непосредственно перед началом любых инвазивных процедур, животных охлаждается в ведерке со льдом на 10-15 минут, по....

Discussion

Мы показали, как выполнять ERG записи, записи оптических нервов, и intraretinal записей на мечехвостов в естественных условиях. Запись методы каждого предоставляют различные понимания нейронных основе видения, и все они могут быть использованы для изучения функции сетчатки в живых благодаря животных большие глаза краба и жесткий панцирь. Оптическая активность нерва может быть даже записал с себя свободно животных в океане при правильном строительстве электродов (4). Эти методы также могут быть выполнены на вырезали глаз.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Светодиодный	источник света	Newark Inc	33C1292
Всасывающий	электрод Электрод	A-M Systems	573000
XCell 3 * 4-канальный внеклеточный усилитель	усилитель	FHC, Inc.	40-40-8B
Усилитель внутриклеточной записи		Cygnus	IR-283A
APM	Neural Spike Discriminator	FHC, Inc.	APM
Bits++	Video Board	Cambridge Research Systems	Bits++
Piezopatch Manipulator	Micropositioner	World Precision Instruments, Inc.
Квадратный стимулятор пульса	Стимулятор нервов	Grass Technologies	Model S48
P-97	Пуллер микропипеток	Sutter Instrument Co.	Модель P-97
Боросиликатное стекло с капиллярным	электродом	World Precision Instruments, Inc.	1B150-4
Horsesh– краб (Limulus polyphemus)	Animal	Marine Biological Laboratories
Micropipette	Puller Glass Puller	Sutter Instrument Co.	P-97
Зум-стереоскоп	Микроскоп	Jed Pella Inc.	СМЗ-168