וידאו זה מדגים כיצד למדוד את הפלישה תא דרך התרבות מוסיף התא באמצעות מתודולוגיה מבוססת הקרינה.
סימן ההיכר של תאים גרורתי הוא היכולת שלהם לחדור דרך הממברנה המרתף לעבור לחלקים אחרים של הגוף. תאים צריכים להיות מסוגלים גם להפריש פרוטאזות כי לשבור את קרום מרתף וכן להעביר כדי להיות פולשני. BD הפלישה BioCoat המערכת מספקת גידול התאים בתנאים המאפשרים הערכה של הרכוש שלהם פולשנית<em> במבחנה</em<sup> 1,2</sup>. זה מורכב פלקון BD FluoroBlok 24-Multiwell פלייט הכנס עם 8.0 מיקרון נקבוביות הממברנה PET בגודל זה כבר מצופה באופן אחיד עם BD Matrigel מטריקס. זו שכבה אחידה של BD Matrigel מטריקס משמשת קרום מרתף מחדש<em> במבחנה</em> מתן מחסום אמיתי פולשני תאים תוך הצגת מבנה החלבון המתאים ללמוד הפלישה. תהליך ציפוי חוסם את הנקבוביות של הממברנה, חסימת פולשני תאים נודדים דרך הממברנה. לעומת זאת, התאים פולשניים מסוגלים לנתק את עצמם ולהעביר דרך הממברנה מצופה. Quantitation הפלישה התא יכולה להיות מושגת על ידי תיוג או לפרסם תאים טרום הפלישה או עם פלורסנט לצבוע כמו המבת"ן<sub> 12</sub> (3) או calcein בבוקר, בהתאמה, מדידת הקרינה של תאים פולשים. מאז קרום FluoroBlok BD ביעילות חוסם את המעבר של אור 490-700 ננומטר ביעילות> 99%, fluorescently שכותרתו תאים לא פלשו לא מזוהים על ידי הקורא התחתונה קריאה צלחת פלואורסצנטי. עם זאת, התאים פלשו לחלק התחתון של הקרום אינם מוגנים ממקור אור מזוהים עם הקורא את הצלחת בהתאמה. וידאו זה מדגים תא הסיום assay הפלישה, באמצעות calcein AM לזהות תאים פלשו.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
BD BioCoat Tumor Invasion System | BD Biosciences | 354165 or 354166 | ||
HT-1080 and NIH/3T3 cells | ATCC | |||
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free) | ||||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS) | ||||
BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control | BD Biosciences | 351157 or 351158 | ||
5% Fetal Bovine Serum in DMEM | ||||
BD Calcein AM Fluorescent Dye | BD Biosciences | 354216 or 354217 | ||
Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) | ||||
BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling | BD Biosciences | 351147 | ||
Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities | PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar. |