このビデオでは、蛍光ベースの方法論を用いて細胞培養用インサートを介して細胞の浸潤を測定する方法を示しています。
転移性細胞の特徴は、基底膜を介して侵入し、体の他の部分に移行する能力です。細胞は、浸潤性であるためには基底膜を分解するだけでなく、移行の両方を分泌するプロテアーゼにできなければなりません。 BDアンジオジェネシスの腫瘍浸潤のシステムは、彼らの侵入特性の評価を可能にする条件下で細胞を提供する<em> in vitroで</em<sup> 1,2</sup>。それは一様にBDマトリゲルマトリックスで被覆された8.0ミクロンの細孔サイズのPETメンブレンのBDファルコンフルオロブロック24マルチウェルインサートプレートで構成されています。 BDマトリゲルマトリックスのこの均一な層は、再構成基底膜として機能<em> in vitroで</em侵略を勉強するための適切なタンパク質の構造を提示しながら>非浸潤細胞に真のバリアを提供する。コーティングプロセスは、膜を介して移行するから非浸潤細胞をブロックし、膜の細孔を吸蔵。対照的に、浸潤細胞から自分自身を切り離し、被覆膜を介して移行することができます。細胞浸潤の定量は、このようなDiICなどの蛍光色素との事前または事後細胞浸潤のラベルのいずれかによって達成することができます。<sub> 12</sub>(3)またはカルセインは、それぞれ、AM、および浸潤細胞の蛍光を測定する。 BDフルオロブロックメンブレンは効果的に> 99%の効率で490から700 nmまでの光の通過を遮断するので、蛍光標識した浸潤していない細胞は下の読書蛍光プレートリーダーで検出されていません。しかし、膜の底面に浸潤している細胞は、光源から遮蔽されなくなりましたし、それぞれのプレートリーダーで検出されています。このビデオでは、カルセインが侵入した細胞を検出するために回答を使用して、エンドポイントの細胞浸潤アッセイを示しています。
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
BD BioCoat Tumor Invasion System | BD Biosciences | 354165 or 354166 | ||
HT-1080 and NIH/3T3 cells | ATCC | |||
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free) | ||||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS) | ||||
BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control | BD Biosciences | 351157 or 351158 | ||
5% Fetal Bovine Serum in DMEM | ||||
BD Calcein AM Fluorescent Dye | BD Biosciences | 354216 or 354217 | ||
Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) | ||||
BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling | BD Biosciences | 351147 | ||
Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities | PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar. |