Cette vidéo montre comment mesurer l'invasion des cellules par le biais inserts de culture cellulaire en utilisant une méthodologie basée sur la fluorescence.
La caractéristique des cellules métastatiques est leur capacité à envahir travers la membrane basale et migrent vers d'autres parties du corps. Les cellules doivent être en mesure de deux protéases sécrètent qui décomposent la membrane basale ainsi que la migration afin d'être envahissantes. BD BioCoat système fournit l'invasion tumorale des cellules avec des conditions qui permettent l'évaluation de leur propriété invasives<em> In vitro</em<sup> 1,2</sup>. Il se compose d'un FluoroBlok BD Falcon 24 Multiwell Plate Insertion avec une membrane 8,0 micron pores PET qui a été uniformément revêtu de BD Matrigel Matrix. Cette couche uniforme de BD Matrigel matrice sert de membrane basale reconstituée<em> In vitro</em> Offrir une véritable barrière à la non-invasif des cellules tout en présentant une structure de protéine appropriée pour étudier l'invasion. Le procédé de revêtement obstrue les pores de la membrane, bloquant non-invasif des cellules de migrer à travers la membrane. En revanche, les cellules invasives sont capables de se détacher de et migrent à travers la membrane revêtue. La quantification de l'invasion des cellules peut être réalisée soit par l'étiquetage pré-ou post-invasion de la cellule avec un colorant fluorescent tel que dIIC<sub> 12</sub> (3) ou calcéine AM, respectivement, et en mesurant la fluorescence des cellules envahissant. Depuis la membrane BD FluoroBlok bloque efficacement le passage de la lumière de 490 à 700 nm avec une efficacité> 99%, marqués à la fluorescence des cellules qui n'ont pas envahi ne sont pas détectés par un lecteur en bas de lecture de plaques de fluorescence. Cependant, les cellules qui ont envahi le dessous de la membrane ne sont plus à l'abri de la source lumineuse et sont détectés avec le lecteur de plaque respectifs. Cette vidéo montre un test d'invasion critère cellule, en utilisant calcéine AM pour détecter les cellules envahies.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
BD BioCoat Tumor Invasion System | BD Biosciences | 354165 or 354166 | ||
HT-1080 and NIH/3T3 cells | ATCC | |||
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free) | ||||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS) | ||||
BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control | BD Biosciences | 351157 or 351158 | ||
5% Fetal Bovine Serum in DMEM | ||||
BD Calcein AM Fluorescent Dye | BD Biosciences | 354216 or 354217 | ||
Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) | ||||
BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling | BD Biosciences | 351147 | ||
Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities | PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar. |