Questo video dimostra come misurare l'invasione delle cellule attraverso inserti in coltura cellulare utilizzando una metodologia basata fluorescenza.
La caratteristica delle cellule metastatiche è la loro capacità di invadere attraverso la membrana basale e migrare in altre parti del corpo. Le cellule devono essere in grado di secernere sia proteasi che degradano la membrana basale e migrare in modo da essere invasiva. BD sistema Tumore BioCoat Invasion fornisce cellule con le condizioni che permettono la valutazione della loro proprietà invasive<em> In vitro</em<sup> 1,2</sup>. Si compone di un Falcon BD FluoroBlok 24-pozzetti Inserire Piatto con una membrana di 8,0 micron, dimensioni dei pori di PET che è stato uniformemente rivestito con BD Matrigel Matrix. Questo strato uniforme di BD Matrigel Matrix funge da membrana basale ricostituita<em> In vitro</em> Fornire una vera e propria barriera per non invasiva cellule pur presentando una struttura adeguata di proteine per lo studio invasione. Il processo di rivestimento occlude i pori della membrana, il blocco non invasiva cellule migrano attraverso la membrana. Al contrario, le cellule invasive sono in grado di staccarsi da e migrano attraverso la membrana rivestita. La quantificazione di invasione delle cellule può essere raggiunto da una pre-o post-invasione delle cellule di etichettatura con un colorante fluorescente come DiIC<sub> 12</sub> (3) o calceina AM, rispettivamente, e misurando la fluorescenza delle cellule invasori. Poiché la membrana BD FluoroBlok blocca efficacemente il passaggio della luce 490-700 nm a efficienza> 99%, fluorescenza marcata cellule che non hanno invaso non vengono rilevati da un approccio bottom-lettura lettore di piastre in fluorescenza. Tuttavia, le cellule che hanno invaso la parte inferiore della membrana non sono più al riparo dalla sorgente di luce e vengono rilevati con il lettore di piastre rispettivi proprietari. Questo video mostra una cella di test endpoint invasione, utilizzando calceina AM per rilevare le cellule invase.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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BD BioCoat Tumor Invasion System | BD Biosciences | 354165 or 354166 | ||
HT-1080 and NIH/3T3 cells | ATCC | |||
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free) | ||||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS) | ||||
BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control | BD Biosciences | 351157 or 351158 | ||
5% Fetal Bovine Serum in DMEM | ||||
BD Calcein AM Fluorescent Dye | BD Biosciences | 354216 or 354217 | ||
Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) | ||||
BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling | BD Biosciences | 351147 | ||
Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities | PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar. |