Karyotyping를위한 인간 배아 줄기 세포의 염색체 확산 준비
Summary
Karyotyping 널리 유전 변경을 검출에 사용되는 간단하고 유용한 기술입니다. 우리가 문화의 유지 이러한 세포의 염색체 상태를 감시하기위한 인간 배아 줄기 세포의 염색체 보급 준비 단계 프로토콜에 의해 단계를 설명합니다.
Abstract
인간 배아 줄기 세포 (hESC) 안정 diploid의 핵형 1 현재까지 표시되어 있지만, 많은 연구가 문화 조건에 따라 그러한 전체의 추가 또는 염색체의 일부로 염색체 이상이 취득하는 경향이 될 것으로보고있다. 효소 또는 화학적 분리가 2,3,4를 사용하는 경우 passaging에 대한 식민지의 수동 절개는 안정적인 핵형 5 유지하면서 실제로 장기적인 문화 중, karyotypic 변경이 관찰됩니다. 게다가, 피더 세포의 제거 등 환경의 변화는 hESC 3,6의 유전자 무결성을 손상하는 것 같습니다. 일단 염색체 변경은 중요한 고려 hESC는 embryogenesis 연구 및 약물 검사에 필수적인 도구로, 체외에서 hESC의 유전자 무결성의 특성을 세포 생리입니다 영향을 미칠 수 있습니다. 또한, 미래의 치료 목적으로 염색체 변화는 그것이 자주 carcinogenesis에 관련된로서 정말 걱정입니다.
여기 우리는 G – banding, 물고기, 하늘 CGH 기법 7,8으로 설정 염색체의 후속 분석을 위해 고품질의 염색체 확산을 얻을 수있는 간단하고 유용한 방법을 보여줍니다. 우리는 translocations과 aneuploidies의 모양을 모니터하기 위해 5 구절의 간격으로 정기적으로 염색체 상태를 확인하는 것이 좋습니다
Priscila Britto과 Rafaela Sartore이 종이에 똑같이 기여.
Protocol
Discussion
염색체 확산의 준비 G – banding과 같은 물고기, 하늘과 CGH와 같은보다 정교한 기술로 일상적 방법으로 배아 줄기 세포의 유전자 상태의 성공적인 분석을 위해 매우 중요한 단계입니다.
이 절차는 세포주기의 길이에 따라 다릅니다 colcemid 부화의 기간을 변화하여 많은 세포 유형에 적용할 수 있습니다. embryoid 시체 (EB)이 시간이 최대 6 시간 수 있지만 배아 줄기 세포의 식민지 위…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 15 ml centrifuge tube | TPP | 91015 | ||
| Colcemid Karyo MAX | Gibco | 15212-012 | ||
| EDTA | Isofar | 721 | ||
| Glacial acetic acid | Isofar | 100 | ||
| Methanol | Isofar | 208 | ||
| Potassium Chloride (KCl) | Merck | 104.931.000 | ||
| Slide | Bioslide | 7105-1 | ||
| Tripsin | SIGMA | T4799 |
References
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