Summary
Dieses Video beschreibt die Methode zur Isolierung von neuroprecursors aus den Entwicklungsländern Kortex embryonaler Mäuse verwendet. Das Verfahren zur Entfernung von Embryonen aus der Gebärmutter, sezieren die kortikale Gewebe und verdauen die isolierten Hirnrinde dargestellt.
Abstract
Primäre neuronale Stammzellen Kulturen sind nützlich für die Untersuchung der Mechanismen des zentralen Nervensystems Entwicklung. Die Stammzellforschung wird unser Verständnis des Nervensystems und kann es uns ermöglichen, Therapien für bisher unheilbare Krankheiten und Verletzungen des Gehirns zu entwickeln. Darüber hinaus sollten Stammzellen für die Stammzellenforschung an die detaillierte Untersuchung von Mechanismen der neuronalen Differenzierung und Transdifferenzierung und die genetischen und umweltbedingten Signale unterstützt werden sollen, dass die direkte Spezialisierung der Zellen in bestimmten Zelltypen. Dieses Video zeigt eine Technik verwendet, um Zellen aus dem Embryonaltag 12,5 Maus dorsalen Vorderhirn aufzuschlüsseln. Die Dissektion Verfahren schließt die Gewinnung E12.5 Maus Embryonen aus der Gebärmutter, die Beseitigung der "Haut" mit feinen Pinzette und schließlich isoliert Stücke Großhirnrinde. Nach der Präparation wird das Gewebe verdaut und mechanisch dissoziiert. Die resuspendierten dissoziierten Zellen werden dann in "Stammzelle" Medien, die das Wachstum von neuralen Stammzellen bevorzugt kultiviert.
Protocol
- Maus neuralen Vorläuferzellen (NPCs) aus E12.5 Embryos Cortex isoliert.
- Haut-und mesenchymale Schichten wurden von seziert telencephalic Vesikel entfernt.
- Die Vesikel wurden in 0,05% Trypsin mit 0,02% EDTA und 0,2% BSA in HBSS für 20 Minuten bei 37 ° C inkubiert
- Trypsinierung wurde von einem gleichen Volumen von 1 mg / ml Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor (Sigma # T6522) in HBSS gestoppt.
- Tissue verdaut wurden dissoziiert über mehrere Runden Verreiben mit feuerpolierte Pasteur Pipetten.
- Die Zellen wurden einmal mit 0,2% BSA in HBSS gewaschen und plattiert bei 50.000 Zellen / ml auf Laminin-beschichtete Deckgläser in Medien mit 20 ng / ml EGF, 10 ng / ml FGF2 (R & D Systems oder PeproTech) und 2 ug / ml Heparin ( Sigma).
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Discussion
Große Fortschritte in unserem Verständnis der Entwicklung des ZNS und Stammzellbiologie wurden möglich durch unsere Fähigkeit zu ernten, zu isolieren und Kultur embryonalen neuralen Stammzellen. Dieses Video zeigt die Zerlegung von E12.5 Maus Großhirnrinde und die anschließende Zerlegung und Kultivierung von embryonalen neuralen Stammzellen. Viele andere ähnliche Methoden wurden erfolgreich von anderen Forschern eingesetzt.
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Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Straight Iris Scissors | Tool | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Medium Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| Micro Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Bent Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11251-35 |
References
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
