Summary
Abstract
Agressão é um comportamento inato que evoluiu no âmbito de defesa ou a obtenção de recursos. Este complexo comportamento social é influenciado por fatores genéticos, hormonais e ambientais. Em muitos organismos, a agressão é crítica para a sobrevivência, mas a agressão controle e repressão em contextos distintos também se tornou cada vez mais importante. Nos últimos anos, os invertebrados têm se tornado cada vez mais útil como sistemas modelo para investigar a base genética e os sistemas biológicos do comportamento social complexo. Isto é em parte devido ao repertório diversificado de comportamentos exibidos por estes organismos. No vídeo que acompanha, esboçamos um método para analisar a agressão em Drosophila cujo projeto engloba importantes eco-etológicas restrições. Detalhes incluem os passos para: fazer uma câmara de luta; isolamento e pintura moscas; acrescentando voa para a câmara de luta, e luta gravação de vídeo. Esta abordagem está sendo utilizada para identificar genes candidatos importante na agressividade e na elaboração do circuito neuronal que subjaz a saída de agressão e outros comportamentos sociais.
Protocol
1. Montagem das paredes da câmara
- Tome duas lâminas de vidro liso, marca o meio nas duas extremidades e usando uma régua reta gumes como um guia, a pontuação do vidro com o cortador de diamante.
- Deslize o cortador de diamante e para trás algumas vezes até ouvir um ruído de raspagem.
- Lavar o vidro, e segurando-a com duas toalhas de papel sobre um recipiente de vidro quebrado, aplique uma leve pressão para fechar a linha marcou com o lado marcado
de costas para você quebrar o slide em duas metades. - Generosamente aplicar o adesivo de vidro ao longo de uma borda de um pedaço de vidro e empurrar um segundo pedaço de vidro contra o adesivo em um ângulo reto com a primeira peça. Coloque sobre uma superfície plana (papel alumínio, papel encerado ou papel regular) e deixar solidificar por pelo menos uma hora.
- Depois de uma hora, repita a aplicação do adesivo passo para formar uma câmara quadrada e deixar endurecer durante a noite.
2. Colocando as paredes em uma placa de Petri
- Leve o topo de uma placa de Petri e preencher a uma profundidade de pelo menos 5 mm com uma solução aquecida de agarose 2% (microondas a agarose em água deionizada até que ele se dissolve totalmente).
- Aguarde alguns minutos, mas ao mesmo tempo dissolvido, colocar as paredes da câmara no centro do prato. Tomar parte inferior da placa de Petri, coloque-o lado de baixo para cima. Usando uma agulha chama-aquecido em linha reta de dissecação, fazer um conjunto de pequenos orifícios (> 1 mm) no centro do prato para ventilação. Faça um buraco maior (~ 4 mm de diâmetro) ligeiramente para o lado para a introdução de moscas para a câmara. Coloque um pedaço de fita de etiqueta removível sobre o buraco maior.
3. Fazer o copo de alimentos
- Aqueça um frasco de comida voar para o ponto onde a comida é derretido. Use uma pipeta Pasteur para transferência de alimentos para um frasco de cintilação fechamento de preenchê-lo para formar uma superfície plana na parte superior. Ter cuidado para evitar bolhas de ar e deixe esfriar.
- Fazer colar fermento fresco por trituração uma pequena quantidade de fermento seco e algumas gotas de água em um almofariz e um pilão. Adicionar mais fermento ou água até que a consistência é espessa o suficiente para permitir que uma pequena gota visível para ser apanhada por um palito e aplicada para o centro da superfície do alimento.
- Coloque o frasco de comida no centro da câmara e coloque no fundo da placa de Petri, invertida para que os lados estão em alta e não obscurecendo a vista, no topo da câmara. Introduzir dois dias 05/03 moscas velhas por aspiração dentro da câmara através do maior buraco no topo. Cobrir o buraco com fita adesiva e coloque um pedaço de papel de filtro preto com um buraco cortado 2 cm de la em cima do prato.
- Coloque uma lâmpada de mesa acima da câmara, longe o suficiente para que ele não vai aquecer a câmara, e posicionado de modo que ele vai iluminar a superfície de alimentos. Todo o conjunto deve idealmente ser colocada em um ambiente com alta umidade e uma temperatura de 22-25 ° C.
4. Começar a filmagem através da parede da frente da câmara quando ambos moscas estão no foodsurface.
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