Мы покажем, как для записи вспышка ответов от одного конуса мыши, используя всасывания электрода.
Abstract
Палочек и колбочек фоторецепторов в сетчатке отвечают за свет обнаружения. В темноте, циклических нуклеотидов закрытого (СПГ) каналы во внешнем сегменте являются открытыми и позволяют катионов течь постоянно внутрь через мембрану, деполяризующего клетки. Освещенность вызывает закрытие каналов СПГ, блоки внутрь катионного тока, и таким образом приводит к ячейке гиперполяризации. На основе полярности фоторецепторов, методом всасывания запись была разработана в 1970-х годов, что, в отличие от классического патч-зажим технику, не требует проникновения в мембране<sup> 1</sup>. Рисование внешней сегмента в плотно облегающие стеклянной пипетки заполнены внеклеточной решение позволяет записывать текущие изменения в отдельных клетках на тест-вспышкой. Однако, это устоявшийся »наружного сегмента в (OS-в)" всасывания записи не подходит для записи мыши конуса, из-за низкого процента конусов в сетчатке мышей (3%) и трудности в определении конуса наружные сегменты. В последнее время внутреннего сегмента в (IS-в) запись конфигурации был разработан, чтобы сделать внутренний сегмент / ядерной области фоторецепторов в записи пипетки<sup> 2,3</sup>. В этом видеоролике мы покажем, как для записи с отдельными мыши конус photoresponses использованием одноклеточных всасывания электрода.
Protocol
Создание электродов Сделать запись электродов использованием съемника микропипетки и польский электродов с отоплением нити под микроскопом. Для мыши конус одноклеточных всасывания записи, внутренний диаметр на конце электрода составляет около 6-7 мкм. Подготовка электрод…
Discussion
Одноклеточный всасывания записи с фоторецепторных клеток был разработан три десятилетия назад. Это дает нам возможность записи трансмембранный ток изменение, вызванное световой стимуляции, не проникая клеточной мембраны. Из-за высокой межклеточной адгезии, трудно выделить одну здор…
Acknowledgements
Поддержке развития карьеры награду от исследований в области профилактики слепоты, NIH грант Е.Ю. 019312, и неограниченный грант исследований в области профилактики слепоты и EY 02 687 (кафедра офтальмологии и Визуальный наук в Университете Вашингтона).