Biz bir emme elektrot kullanarak tek bir fare kozalakları flaş cevaplarını kaydetmek için nasıl gösterecektir.
Abstract
Çubuk ve koni retinadaki fotoreseptör ışık algılama sorumludur. Karanlıkta, dış segmente siklik nükleotid kapılı (CNG) kanalları açıktır ve katyonların hücre depolarize zarından içeri doğru istikrarlı bir şekilde akmasına izin verin. Işığa maruz kalma CNG kanalları, bloklar içe katyon akım, ve böylece hücre hiperpolarizasyon sonuçları kapatılması tetikler. Fotoreseptörlerin polarite dayanarak, bir emme kayıt yöntemi klasik yama klemp tekniği aksine, plazma zarı delinmesi gerektirmez, 1970'li yıllarda geliştirilen<sup> 1</sup>. Ekstrasellüler çözümü ile dolu sıkı oturan bir cam pipet içine dış segmente Çizim test flaş pozlama üzerine tek tek hücrelerin içinde güncel değişiklikler kayıt sağlar. Ancak, bu köklü "dış segment (OS)" emme kayıt fare retinanın koni düşük oranda (% 3) ve koni belirlenmesinde zorluklar nedeniyle, fare koni kayıtları için uygun değildir dış segmentleri. Son zamanlarda, bir iç-segment (IS) kayıt yapılandırma kayıt pipet içine iç segment / fotoreseptör nükleer bölge çizmek için geliştirilmiştir<sup> 2,3</sup>. Bu video, tek hücreli emme elektrot kullanarak bireysel fare koni photoresponses nasıl kayıt gösterecektir.
Protocol
Elektrotlar yapma Mikropipet çektirmenin kullanarak kayıt elektrotları olun ve mikroskop altında ısıtma filament elektrotlar lehçe. Fare koni tek hücreli emme kayıt için, elektrot ucu iç çapı yaklaşık 6-7 mm. Referans elektrot hazırlayın. Distile su içinde% 1 agar tartılır. Agar çözüm sıcak su banyosunda eritin. Şırınga kullanarak% 1 agar ile cam pipetler (L = 100 mm, OD / ID = 1/0.75 mm) doldurun. 10 dakika boyunca oda sıcaklığında agar katılaşmaya. Pipetl…
Discussion
Fotoreseptör hücrelerinin Tek hücreli emme kayıt 3 yıl önce geliştirilmiştir. Bu hücre zarının delinmesi ışık stimülasyonu ile indüklenen trans-membran geçerli değişikliği kaydetmek için bize sağlar. Yüksek hücre-hücre adezyon Çünkü, amfibi retina gibi fare retinanın sağlıklı tek bir çubuk ve koni izole etmek zor ve düşük oranda (% 3) ve küçük boyutu nedeniyle bireysel konileri bulmak zordur. Iç kademeli (IS-in) kayıt yöntemi bir koni dahil olabilir, bunların arasında birkaç …
Acknowledgements
Körlük ve EY 02.687 (Washington Üniversitesi Göz Hastalıkları ve Görsel Bilimleri Bölümü) önleyin Araştırma Körlük, NIH hibe EY 019.312 ve sınırsız ödenekle Önlemek için Kariyer Geliştirme Ödülü Research tarafından desteklenir.