जीना के चुंबकीय अनुनाद स्पेक्ट्रोस्कोपी ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर जादू कोण स्पिनिंग का उपयोग
Summary
इस तकनीक के लिए उच्च संकल्प जादू कोण कताई प्रोटोन एमआर स्पेक्ट्रोस्कोपी (HRMAS 1h के मिसेज) का उपयोग सक्षम बनाता है जीना के आणविक लक्षण वर्णन<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</emएक पारंपरिक 14.1 tesla स्पेक्ट्रोमीटर के साथ> एक HRMAS जांच के साथ सुसज्जित है.
Abstract
उच्च संकल्प जादू कोण स्पिनिंग (HRMAS) प्रोटॉन चुंबकीय अनुनाद स्पेक्ट्रोस्कोपी (<sup> 1</sup> एच – मिसेज) एक उपन्यास तकनीक गैर विनाशकारी है कि वर्णक्रमीय रेखा – चौड़ाई में सुधार और उच्च संकल्प स्पेक्ट्रा के लिए अर्क, कोशिकाओं बरकरार, सेल संस्कृतियों, और अधिक महत्वपूर्ण बात बरकरार ऊतक से प्राप्त किया जा चयापचयों और सेलुलर प्रक्रियाओं के बीच संबंधों की जांच करने की अनुमति देता है.<em> Vivo में</em> HRMAS<sup> 1</sup> एच – मिसेज अध्ययन अभी तक रहते फल मक्खी में सूचित किया है<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर.</em><em> ड्रोसोफिला,</em> एक सरल आनुवंशिक जीव के रूप में, पूरे जीव स्तर पर कई जैविक कार्यों और evolutionarily संरक्षित विभिन्न संकेत दे रास्ते की जांच करने के लिए अनुमति देता है और यह आनुवंशिकी और शरीर विज्ञान की जांच के लिए एक उपयोगी मॉडल है. यह अंत करने के लिए, हम विकसित और कार्यान्वित एक<em> Vivo में</em> HRMAS<sup> 1</sup> एच – मिसेज विधि जीने की जांच<em> ड्रोसोफिला</em> 14.1 यहाँ टी. में, हम एक HRMAS रूपरेखा<sup> 1</sup> एच मिसेज के आणविक लक्षण वर्णन के लिए प्रोटोकॉल<em> ड्रोसोफिला</em> एक पारंपरिक एमआर एक HRMAS जांच के साथ सुसज्जित स्पेक्ट्रोमीटर के साथ. इस तकनीक में एक उपन्यास है,<em> Vivo में,</em> गैर विनाशकारी<em> ड्रोसोफिला</em> Metabolite माप दृष्टिकोण है, जो बीमारी biomarkers की पहचान सक्षम बनाता है और इस प्रकार उपन्यास चिकित्सात्मक विकास के लिए योगदान कर सकते हैं.
Protocol
Discussion
फल में vivo एमआरआई में की व्यवहार्यता की ताजा रिपोर्ट के अपवाद के साथ 6 मक्खियों, ड्रोसोफिला में vivo मिसेज अध्ययन में अभी तक रिपोर्ट नहीं किया गया है . वर्तमान प्रोटोकॉल में, हम biologically महत?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के हिस्से में एक राष्ट्रीय स्वास्थ्य (NIH) के अनुदान AI063433 के लारेंस जी Rahme संस्थानों, स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान संस्थान (एनआईएच) रोनाल्ड जी Tompkins (ए Aria Tzika, के निदेशक के लिए केंद्र अनुदान (P50GM021700) द्वारा समर्थित किया गया एनएमआर) कोर, और एक Shriner अस्पताल ए Aria Tzika बच्चों अनुसंधान अनुदान (# 8893) के लिए. हम Dionyssios Mintzopoulos पीएच.डी. धन्यवाद इस प्रोटोकॉल और Ovidiu सी. Andronesi पीएच.डी. के विकास के प्रारंभिक चरणों में सहायता के लिए TOBSY पल्स अनुक्रम के साथ सहायता के लिए.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Deuterium oxide | Reagent | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, sucrose, yeast, cornmeal | Food | Genesee Scientific Corporation | http://www.flystuff.com/ | |
| Oregon RS or Canton-S flies | Adult fly lines | Bloomington Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Paintbrush | Equipment | (size 0) | ||
| 2ml tubes | Equipment | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Fly incubators | Equipment | high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle. | ||
| Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| 4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) | Equipment | Bruker Bio-Spin | B3829 (Bruker store) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Software | 1D NMR spectra analysis http://mestrelab.com/ |
||
| SPARKY 3, USCF | Software | 2D NMR spectra
analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
References
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- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. 29, 688-691 (1958).
- Andronesi, O. C., Mintzopoulos, D., Struppe, J., Black, P. M., Tzika, A. A. Solid-state NMR adiabatic TOBSY sequences provide enhanced sensitivity for multidimensional high-resolution magic-angle-spinning 1H MR spectroscopy. J Magn Reson. 193, 251-258 (2008).
- Astrakas, L. G. Proton NMR spectroscopy shows lipids accumulate in skeletal muscle in response to burn trauma-induced apoptosis. Faseb J. 19, 1431-1440 (2005).
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- Zektzer, A. S. Improved signal to noise in high-resolution magic angle spinning total correlation spectroscopy studies of prostate tissues using rotor-synchronized adiabatic pulses. Magn Reson Med. 53, 41-48 (2005).
