En modell av Disturbed Flow-Induced ateroskleros hos mus Carotid Artery genom partiell Ligation och en enkel metod för RNA Isolering från Carotid endotelet
Summary
Detta beskriver en partiell halspulsådern ligation kirurgi, som orsakar störd flödesförhållanden och påföljande åderförkalkning utveckling (två veckor) med intraplaque neo-vaskularisering (i fyra veckor) i musen gemensamma halspulsådern. Vi beskriver också en ny metod av RNA isolering från halspulsådern Intima, vilket ger hög renhet endothelial RNA.
Abstract
Trots den välkända nära samarbete har direkta bevis för sambandet mellan störd flöde till aterogenes saknats. Vi har nyligen använde en modifierad version av halspulsådern partiella ligation metoder [1,2] för att visa att det akut inducerar låg och oscillerande flödesförhållanden, två viktiga egenskaper störd flöde, i musen gemensamma halspulsådern. Med hjälp av denna modell har vi tillhandahållit direkta bevis som störde flödet verkligen leder till snabb och robust åderförkalkning utveckling i apolipoprotein E Knockoutmusens [3]. Vi utvecklade också en metod av endotelceller RNA förberedelser med hög renhet från musen halspulsådern Intima [3]. Med denna musmodell och metod, fann vi att delvis ligation orsakar endoteldysfunktion på en vecka, följt av en stark och snabb aterom formation i två veckor i en hyperlipidemic musmodell tillsammans med inslag av komplexa lesioner som intraplaque kärlnybildning med fyra veckor. Den snabba<em> In vivo</em> Modellen och endothelial RNA preparatet metod skulle kunna användas för att bestämma molekylära mekanismerna bakom flödet beroende reglering av vaskulär biologi och sjukdomar. Dessutom kan den användas för att testa olika terapeutiska interventioner riktade endoteldysfunktion och åderförkalkning avsevärt minskat studiens varaktighet.
Protocol
Discussion
Vid detta förfarande är korrekt identifiering av alla grenar av den gemensamma halspulsådern inklusive externa halspulsådern, carotis interna, skallbenet artär och överlägsen sköldkörtel artär viktigt. Det är också viktigt att kontrollera flödet mönster med hjälp av ultraljud som visade. I våra erfarna händer, är vår framgång partiella ligation operationer baseras på ultraljud studier av mer än 500 möss bättre än 90%. För halspulsådern intimans RNA beredningar, är det viktigt att uppmärksamm…
Acknowledgements
Detta arbete stöddes av medel från NIH bidrag HL87012 (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, GD, HJ) och ett World Class universitet Project (HJ) från ministeriet för vetenskap, teknologi och utbildning i Sydkorea.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Normal Saline (0.9% sodium chloride) | Baxter | 2B1323 | ||
| Insulin syringe (3/10 ml 29g syringe) | Tyco Health care | 8881600145 | ||
| HBSS | Cellgro, Mediatech, Inc. | 21-023 | ||
| miRNeasy mini kit (including, QIAzol) | QIAGEN | 217004 | ||
| Vevo 770 High-Resolution Micro-Imaging System | Visualsonics | a.Visualsonics 770 system b.Imaging stage c.Vevo integrated rail system d.RMV scan head for mice |
or similar system | |
| 6-0 Silk Suture, sterile | Covidien | s-1172 c2 | ||
| Small scissors | Roboz | RS-5675 | or similar | |
| Dissecting Forceps | Roboz | RS-5005 | or similar | |
| Tissue Mend II | Webster Vet Supply | 07-856-7946 |
References
- Korshunov, V. A., Berk, B. C. Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).
- Sullivan, C. J., Hoying, J. B. Flow-dependent remodeling in the carotid artery of fibroblast growth factor-2 knockout mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (7), 1100-1105 (2002).
- Nam, D. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (4), H1535-H1543 (2009).
