部分的ライゲーションによるマウス頸動脈における乱流誘発アテローム性動脈硬化症と頸動脈内皮からのRNA単離の方法における簡便な方法のモデル
Summary
これは、マウスの総頚動脈のintraplaque新血管形成（4週間）と（二週間で）乱流の条件とその後のアテローム性動脈硬化症の発展の原因となる部分的な頸動脈結紮術を、説明します。我々はまた、高純度内皮RNAを提供する、頸動脈内膜からのRNA分離の新しい方法を説明します。
Abstract
よく知られている密接な関係にもかかわらず、アテローム発生する乱流を結ぶ直接的な証拠が欠けていた。我々は最近、急性マウス頸動脈に、、乱流の2つの重要な特性を低くし、振動流の条件を誘導することを示すために頸動脈部分的ライゲーション法[1,2]の修正版を使用している。このモデルを使用して、我々は、乱流が実際にアポEノックアウトマウスで迅速かつ堅牢なアテローム性動脈硬化症の開発[3]を導くことを示す直接的な証拠を提供している。我々はまた、マウス頸動脈内膜からの高純度を持つ内皮RNA調製の方法[3]を開発した。このマウスモデルと方法を使用して、我々は、その部分的なライゲーションが4週間でこのようなintraplaque血管新生などの複雑病変形成の機能と共に高脂血症のマウスモデルでの二週間で、堅牢かつ迅速なアテローム形成に続いて、週に内皮機能障害を引き起こすが見つかりました。この急速な<em> in vivoで</em>モデルと内皮RNAの調製法は、血管生物学と疾患の流量依存性の調節の分子メカニズムを決定するために使用することができる。また、それが大幅に削減研究期間における内皮機能障害とアテローム性動脈硬化症をターゲットとする様々な治療的介入をテストするために使用することができる。
Protocol
Discussion
この手順では、外頸動脈、内頸動脈、後頭動脈と上甲状腺動脈を含む、総頸動脈のすべての支店の適切な識別が不可欠です。示すように超音波を使用してフローのパターンを検証することも重要です。当社の経験豊富な手で、500以上のマウスの超音波の研究に基づいて部分的な結紮手術の私達の成功率は90％よりも優れています。頸動脈内膜RNA調製には、まず血流のステップの後に頸動脈の?…
Acknowledgements
この作品は、科学、技術と韓国の教育省からのNIH助成HL87012（HJ）、HL75209（HJ）、UO1HL80711（DH、DG、HJ）とワールドクラスの大学プロジェクト（HJ）からの資金によって支えられている。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Normal Saline (0.9% sodium chloride) | Baxter | 2B1323 | ||
| Insulin syringe (3/10 ml 29g syringe) | Tyco Health care | 8881600145 | ||
| HBSS | Cellgro, Mediatech, Inc. | 21-023 | ||
| miRNeasy mini kit (including, QIAzol) | QIAGEN | 217004 | ||
| Vevo 770 High-Resolution Micro-Imaging System | Visualsonics | a.Visualsonics 770 system b.Imaging stage c.Vevo integrated rail system d.RMV scan head for mice |
or similar system | |
| 6-0 Silk Suture, sterile | Covidien | s-1172 c2 | ||
| Small scissors | Roboz | RS-5675 | or similar | |
| Dissecting Forceps | Roboz | RS-5005 | or similar | |
| Tissue Mend II | Webster Vet Supply | 07-856-7946 |
References
- Korshunov, V. A., Berk, B. C. Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).
- Sullivan, C. J., Hoying, J. B. Flow-dependent remodeling in the carotid artery of fibroblast growth factor-2 knockout mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (7), 1100-1105 (2002).
- Nam, D. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (4), H1535-H1543 (2009).
