Um modelo de Disturbed Aterosclerose Flow-induzido em rato artéria carótida pela ligadura parcial e um método simples de isolamento de RNA a partir do endotélio Carótidas
Summary
Esta descreve uma cirurgia de ligadura parcial da carótida, o que causa as condições de fluxo perturbado e desenvolvimento da aterosclerose subsequente (em duas semanas) com intraplaca neo-vascularização (em quatro semanas) em ratos artéria carótida comum. Descrevemos também um novo método de isolamento de RNA a íntima carótida, proporcionando RNA de alta pureza endoteliais.
Abstract
Apesar da conhecida associação perto, evidências diretas ligando fluxo perturbado a aterogênese tem faltado. Recentemente, usou uma versão modificada do carótida métodos de ligadura parcial [1,2] para mostrar que induz agudamente condições de baixo fluxo e oscilatório, duas características-chave do fluxo perturbado, no rato artéria carótida comum. Usando esse modelo, nós fornecemos evidências diretas de que o fluxo perturbado realmente leva ao desenvolvimento de aterosclerose rápido e robusto em apolipoproteína rato knockout E [3]. Também desenvolveu um método de preparação de RNA endotelial com elevado grau de pureza da carótida íntima do mouse [3]. Usando este modelo de mouse e método, encontramos que a ligadura parcial causa disfunção endotelial em uma semana, seguido pela formação de ateromas robusta e rápida em duas semanas em um modelo de camundongo hiperlipidêmicos, juntamente com recursos de formação de lesão complexa como a neovascularização intraplaca por quatro semanas. Essa rápida<em> In vivo</em> Modelo eo método de preparação endotelial RNA poderia ser usado para determinar os mecanismos moleculares subjacentes fluxo de regulação dependente da biologia vascular e doenças. Além disso, ele poderia ser usado para testar várias intervenções terapêuticas visando a disfunção endotelial e aterosclerose na duração do estudo consideravelmente reduzido.
Protocol
Discussion
Neste procedimento, a identificação adequada de todos os ramos da carótida comum, incluindo a carótida externa, carótida interna, artéria occipital e da artéria tireóidea superior é essencial. Também é importante verificar o padrão de fluxo com ultra-som, como demonstrado. Em nossas mãos experientes, nossa taxa de sucesso de cirurgias ligadura parcial com base nos estudos de ultra-som de mais de 500 ratos é melhor do que 90%. Para a carótida preparações íntima RNA, é importante prestar atenção à ap…
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por recursos do NIH concede HL87012 (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, DG, HJ) e um World Class University Project (HJ) do Ministério da Ciência, Tecnologia e Educação de S. Korea.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Normal Saline (0.9% sodium chloride) | Baxter | 2B1323 | ||
| Insulin syringe (3/10 ml 29g syringe) | Tyco Health care | 8881600145 | ||
| HBSS | Cellgro, Mediatech, Inc. | 21-023 | ||
| miRNeasy mini kit (including, QIAzol) | QIAGEN | 217004 | ||
| Vevo 770 High-Resolution Micro-Imaging System | Visualsonics | a.Visualsonics 770 system b.Imaging stage c.Vevo integrated rail system d.RMV scan head for mice |
or similar system | |
| 6-0 Silk Suture, sterile | Covidien | s-1172 c2 | ||
| Small scissors | Roboz | RS-5675 | or similar | |
| Dissecting Forceps | Roboz | RS-5005 | or similar | |
| Tissue Mend II | Webster Vet Supply | 07-856-7946 |
References
- Korshunov, V. A., Berk, B. C. Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).
- Sullivan, C. J., Hoying, J. B. Flow-dependent remodeling in the carotid artery of fibroblast growth factor-2 knockout mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (7), 1100-1105 (2002).
- Nam, D. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (4), H1535-H1543 (2009).
