Un modelo de Disturbed inducida por el flujo de Aterosclerosis en la arteria carótida del ratón por la ligadura parcial y un método sencillo para el aislamiento de ARN del endotelio carótida

Summary

Esto describe una cirugía de ligadura de la carótida parcial, lo que provoca trastornos condiciones de flujo y posterior desarrollo de la aterosclerosis (en dos semanas) con intraplaca neovascularización (en cuatro semanas) en el ratón de la arteria carótida común. También describe un nuevo método de aislamiento de ARN de la carótida íntima, proporcionando ARN de alta pureza endoteliales.

Abstract

A pesar de la estrecha asociación conocida, evidencia la vinculación directa alteración del flujo de la aterogénesis ha estado ausente. Recientemente, hemos utilizado una versión modificada de la carótida métodos de ligadura parcial [1,2] para demostrar que forma aguda induce condiciones de flujo bajo y oscilante, dos características fundamentales de la alteración del flujo, en el ratón de la arteria carótida común. El uso de este modelo, hemos proporcionado evidencia directa de que el flujo alterado de hecho conduce a un desarrollo rápido y robusto aterosclerosis en ratones apolipoproteína E nocaut [3]. También hemos desarrollado un método de preparación de ARN endoteliales de alta pureza a partir de la íntima carotídea ratón [3]. El uso de este modelo de ratón y el método, se encontró que la ligadura parcial provoca la disfunción endotelial en una semana, seguido por la formación de ateroma robusto y rápido de dos semanas en un modelo de ratón hiperlipidémicos junto con las características de la formación de lesiones complejas, como la neovascularización intraplaca por cuatro semanas. Esta rápida<em> In vivo</emModelo> y el endotelio método de preparación de ARN podría ser utilizado para determinar los mecanismos moleculares subyacentes de flujo dependen de la regulación de la biología y las enfermedades vasculares. Además, podría ser utilizado para poner a prueba diversas intervenciones terapéuticas dirigidas a la disfunción endotelial y aterosclerosis en la duración del estudio reducido considerablemente.

Protocol

1. La ligadura parcial de la arteria carótida izquierda Los ratones son utilizados en ~ 8 semanas de edad. El peso de los ratones se recomienda tener al menos 18 gramos. Esterilizar los instrumentos durante 30 segundos en el esterilizador de instrumentos de cuentas y deje que se enfríe Inducir la anestesia con ketamina (80mg/kg) y xilazina (10mg/kg) anestesia intraperitoneal (ip) o una alternativa aprobada por IACUC. Para la inyección ip, inyectar ratón en el cuadrante inferior izquier…

Discussion

En este procedimiento, la identificación adecuada de todas las ramas de la carótida común, incluyendo la carótida externa, la carótida interna, arteria occipital y la arteria tiroidea superior es esencial. También es importante verificar el patrón de flujo con ultrasonido como se ha demostrado. En nuestras manos experimentadas, nuestra tasa de éxito de las cirugías de ligadura parcial basado en los estudios de ultrasonido de más de 500 ratones es superior al 90%. De la carótida íntima preparaciones de ARN, e…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Normal Saline (0.9% sodium chloride)		Baxter	2B1323
Insulin syringe (3/10 ml 29g syringe)		Tyco Health care	8881600145
HBSS		Cellgro, Mediatech, Inc.	21-023
miRNeasy mini kit (including, QIAzol)		QIAGEN	217004
Vevo 770 High-Resolution Micro-Imaging System		Visualsonics	a.Visualsonics 770 system b.Imaging stage c.Vevo integrated rail system d.RMV scan head for mice	or similar system
6-0 Silk Suture, sterile		Covidien	s-1172 c2
Small scissors		Roboz	RS-5675	or similar
Dissecting Forceps		Roboz	RS-5005	or similar
Tissue Mend II		Webster Vet Supply	07-856-7946