Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica

doi: 10.3791/1989 Published: December 4, 2010

Summary

Este vídeo demonstra o modelo de transplante ortotópico aórtica como um modelo simples para estudar o desenvolvimento de vasculopatia do transplante (TVP) em ratos.

Abstract

Modelos de pesquisa de rejeição crônica são essenciais para investigar processos fisiopatológicos Pathobiological e durante o desenvolvimento da vasculopatia do transplante (TVP).

O modelo animal comumente utilizado para estudos cardiovascular rejeição crônica é o modelo de transplante cardíaco heterotópico realizado em roedores de laboratório. Este modelo é amplamente utilizado em experimentos desde Ono e Lindsey (3) publicaram a sua técnica. Para analisar os achados nos vasos sanguíneos, o coração tem que ser seccionado e todos os navios têm de ser medidos.

Outro método para investigar a rejeição crônica em questionamentos cardiovascular é o modelo de transplante da aorta (1, 2). No modelo ortotópico aórtica transplante, a aorta pode ser facilmente avaliada histologicamente (2). O modelo de PVG-to-ACI é especialmente útil para CAV estudos, pois a rejeição vascular aguda não é um fator importante de confusão e tratamento Ciclosporina A (CsA) não impede o desenvolvimento do CAV, similar ao que encontramos no contexto clínico (4 ). A7-dia período de CsA é necessária neste modelo para evitar a rejeição aguda e para alcançar sobrevivência a longo prazo com o desenvolvimento de TVP.

Este modelo também pode ser usado para investigar rejeição celular aguda e necrose media em modelos xenogénicos (5).

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ratos com peso aproximado de 250-300g forem comprados de Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld).
Transplantes são realizados com ratos PVG como doadores, e ratos ACI como destinatários.

Os ratos são alojados em condições convencionais, alimentados padrão ração e água ad libidum.

Todos os instrumentos cirúrgicos são esterilizados antes da utilização.

Preparação dos doadores:

Anestesiar ratos com isoflurano (2,5-3%) utilizando uma câmara de indução.

  1. Raspar o cabelo abdominal e torácica e coloque o rato sobre as suas costas e colocar uma máscara sobre seu nariz e boca para manter a anestesia.
  2. Desinfectar a zona abdominal e torácica amplamente utilizando Iodo-Provo, use próxima de etanol 80%, repita este passo três vezes.
  3. Verifique reflexos beliscar as patas traseiras para ter a certeza que o rato é suficiente anestesiado.
  4. Desangrar o rato, abrindo o abdômen e corte um buraco na aorta abdominal.
  5. Abra cuidadosamente o tórax para encontrar a aorta torácica descendente.
  6. Dissecar a aorta torácica dos tecidos circundantes, como gordura, nervos e do esôfago.
  7. Retirar um pedaço 1,5 centímetros da aorta utilizando um couter, sem danos aos tecidos da aorta.
  8. Perfundir o enxerto aórtico cuidadosamente com salina estéril fria e guardar o enxerto, a 4 ° C.

Destinatário:

Anestesiar ratos com isoflurano (2,5-3%) utilizando uma câmara de indução. Temperatura corporal é mantida durante o procedimento cirúrgico.

  1. Shave área abdominal e aplicar pomada para evitar os olhos de secar durante a anestesia.
  2. Coloque o rato sobre as suas costas e colocar uma máscara sobre seu nariz e boca para manter a anestesia.
  3. Desinfetar a área abdominal utilizando Iodo-Provo, use próxima de etanol 80%, repita este passo três vezes.
  4. Verifique reflexos beliscar as patas traseiras para ter a certeza que o rato é suficiente anestesiado.
  5. Realizar uma incisão mediana abdominal separando a pele eo músculo em duas etapas para abrir o abdômen.
  6. Coloque o intestino em uma luva de pó aquecido salina hidratada livre. Dobre a luva ao redor do intestino para evitar a perda de umidade.
  7. Remover o tecido gorduroso que cobre a aorta abdominal.
  8. Dissecar a aorta formam a região infra-renal até a bifurcação, cuidado para não causar danos nos ramos dos vasos.
  9. Se necessário ramos ligadura da aorta.
  10. Primeiro utilize uma pinça microcirúrgica por parte da aorta infra-renal dissecados para parar o fluxo de sangue.
  11. Em seguida, coloque uma braçadeira segundo próximo à bifurcação da aorta.
  12. Agora que o fluxo sanguíneo é interrompido, retire um pequeno segmento da aorta.
  13. Leve o enxerto da aorta do doador, que foi mantida em 0,9% salina estéril no gelo, encurtá-lo para o comprimento adequado e posicioná-lo na brecha.
  14. Conectam a aorta do doador para o receptor aorta, realizando sutura prolene 8-0 sutura usando (Ethicon, Norderstedt, Alemanha). Comece com a anastomose término-de-final do crânio.
  15. Quando a anastomose término-a-ponta distal terminar, abra cuidadosamente a braçadeira distal.
  16. Quando não há sangramento após a abertura da pinça distal, com cuidado abra o grampo craniana. Em caso de sangramento nas suturas, feche o clamp novamente, localizar o sangramento e parar o sangramento usando um ponto único.
  17. Deve haver um pulso visível na extremidade distal da aorta.
  18. Em seguida mova o intestino volta para o abdômen.
  19. Lave o abdome com solução salina estéril pré-aquecido.
  20. Feche a camada muscular da parede abdominal com prolene 6-0 sutura (Ethicon, Norderstedt, Alemanha).
  21. Use 5-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, Alemanha), sutura contínua para fechar a pele.
  22. Enquanto o rato ainda está em anestesia, injetar 4-5mg/kg carprofeno por via subcutânea.
  23. Para oferecer analgesia suficiente para este tipo de procedimento, metamizol é adicionado à água potável (50 mg por 100 ml metamizol) para dor medicação por 3 dias após o transplante.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Por várias razões encontramos o modelo de transplante ortotópico aórtica de forma mais precisa para investigar o desenvolvimento de TVP em comparação com o modelo de transplante cardíaco heterotópico:
Quanto a técnica cirúrgica, o modelo de transplante aórtica incorpora um método de fácil possível, exigindo apenas o cumprimento de fim-de-final da anastomose, enquanto que o modelo de transplante cardíaco heterotópico pode ser considerado um desafio mais complexo e propenso a erros de habilidades do cirurgião s , exigindo término-lateral-anastomose em dois grandes vasos.

Análise e medição de amostras histológicas é drasticamente facilitada desde vasculopatia transplante pode ser examinado em um único vaso de diâmetro única contrapartida definida em vez de a exploração de numerosos pequenos vasos cardíacos mostrando uma grande variedade no tamanho e na constituição que poderia deficiência o pesquisador na obtenção de objetivos e resultados credíveis. A aorta torácica do destinatário pode servir como controle normal, oferecendo um objeto fácil e confiável de comparação de diâmetro e aspecto morfológico, enquanto no modelo de transplante cardíaco heterotópico é difícil comparar vasos peri-ou miocárdio subjacente a uma grande variabilidade interindividual.

Além destes achados, aloenxertos aórticos não são tão propensos a ruptura alterações histológicas que podem resultar de os procedimentos aplicados cirúrgico. Fibrose ou infarto pode ocorrer em e possivelmente afetar tecidos para transplante heterotópico de coração e vasos embutidos, tornando-os impróprios para a avaliação.

Devido ao seu tamanho e constituição, a aorta é um tema ideal para a investigação simples e exata de remodelação morfológica, bioquímica e molecular dentro de cada uma das três camadas da parede vascular, tais como o grau de espessamento intimal concêntrica, necrose dos miócitos na mídia ou a síntese aumentada de citocinas e fatores de crescimento.

A resposta imune gerada por um enxerto de aorta é fato suficiente para provocar alterações crônicas no transplante, mas foi considerada insuficiente para induzir episódios de rejeição aguda (2). Graças a esta imunogenicidade intermediária do enxerto, não perdeu para o transplante é a rejeição aguda e nenhum tratamento imunossupressor inicial com CsA é necessária. O modelo permite, assim, para investigar os efeitos iniciais de drogas na vasculopatia crônica do enxerto sem a influência ou adulteração por imunossupressão profilática muitas vezes visto em transplantes cardíaco heterotópico (2, 4).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Não há conflitos de interesse declarados.

Acknowledgments

Os autores agradecem Christiane Pahrmann por seu trabalho histológico.

Financiamento

Sonja Schrepfer recebeu uma bolsa de pesquisa do Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 e SCHR992/4-1).]

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical microscope (magnification 25x)
Isoflurane
shaver
Provo-Iodine
ice cold 0.9% saline
prewarmed 0.9% sterile saleine
eye ointment
glove
microsurgical scissirs
forceps
clamps
8-0 suture (prolene)
6-0 suture (prolene)
5-0 suture (prolene)
Carprofen
Metamizol
Q-tips

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778. Transplantation. 85, 870-877 (2008).
  2. Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).
  3. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).
  4. Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model. Circulation. 100, 67-100 (1999).
  5. Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy. J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).
Transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Stubbendorff, M., Deuse, T., Hammel, A., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., Schrepfer, S. Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy. J. Vis. Exp. (46), e1989, doi:10.3791/1989 (2010).More

Stubbendorff, M., Deuse, T., Hammel, A., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., Schrepfer, S. Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy. J. Vis. Exp. (46), e1989, doi:10.3791/1989 (2010).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter