Transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica

Summary

Este vídeo demonstra o modelo de transplante ortotópico aórtica como um modelo simples para estudar o desenvolvimento de vasculopatia do transplante (TVP) em ratos.

Abstract

Modelos de pesquisa de rejeição crônica são essenciais para investigar processos fisiopatológicos Pathobiological e durante o desenvolvimento da vasculopatia do transplante (TVP).

O modelo animal comumente utilizado para estudos cardiovascular rejeição crônica é o modelo de transplante cardíaco heterotópico realizado em roedores de laboratório. Este modelo é amplamente utilizado em experimentos desde Ono e Lindsey (3) publicaram a sua técnica. Para analisar os achados nos vasos sanguíneos, o coração tem que ser seccionado e todos os navios têm de ser medidos.

Outro método para investigar a rejeição crônica em questionamentos cardiovascular é o modelo de transplante da aorta (1, 2). No modelo ortotópico aórtica transplante, a aorta pode ser facilmente avaliada histologicamente (2). O modelo de PVG-to-ACI é especialmente útil para CAV estudos, pois a rejeição vascular aguda não é um fator importante de confusão e tratamento Ciclosporina A (CsA) não impede o desenvolvimento do CAV, similar ao que encontramos no contexto clínico (4 ). A7-dia período de CsA é necessária neste modelo para evitar a rejeição aguda e para alcançar sobrevivência a longo prazo com o desenvolvimento de TVP.

Este modelo também pode ser usado para investigar rejeição celular aguda e necrose media em modelos xenogénicos (5).

Protocol

Ratos com peso aproximado de 250-300g forem comprados de Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld).
Transplantes são realizados com ratos PVG como doadores, e ratos ACI como destinatários.

Os ratos são alojados em condições convencionais, alimentados padrão ração e água ad libidum.

Todos os instrumentos cirúrgicos são esterilizados antes da utilização.

Preparação dos doadores:

Anestesiar ratos com isoflurano (2,5-3%) utilizando uma câmara de indução.

1. Raspar o cabelo abdominal e torácica e coloque o rato sobre as suas costas e colocar uma máscara sobre seu nariz e boca para manter a anestesia.
2. Desinfectar a zona abdominal e torácica amplamente utilizando Iodo-Provo, use próxima de etanol 80%, repita este passo três vezes.
3. Verifique reflexos beliscar as patas traseiras para ter a certeza que o rato é suficiente anestesiado.
4. Desangrar o rato, abrindo o abdômen e corte um buraco na aorta abdominal.
5. Abra cuidadosamente o tórax para encontrar a aorta torácica descendente.
6. Dissecar a aorta torácica dos tecidos circundantes, como gordura, nervos e do esôfago.
7. Retirar um pedaço 1,5 centímetros da aorta utilizando um couter, sem danos aos tecidos da aorta.
8. Perfundir o enxerto aórtico cuidadosamente com salina estéril fria e guardar o enxerto, a 4 ° C.

Destinatário:

Anestesiar ratos com isoflurano (2,5-3%) utilizando uma câmara de indução. Temperatura corporal é mantida durante o procedimento cirúrgico.

1. Shave área abdominal e aplicar pomada para evitar os olhos de secar durante a anestesia.
2. Coloque o rato sobre as suas costas e colocar uma máscara sobre seu nariz e boca para manter a anestesia.
3. Desinfetar a área abdominal utilizando Iodo-Provo, use próxima de etanol 80%, repita este passo três vezes.
4. Verifique reflexos beliscar as patas traseiras para ter a certeza que o rato é suficiente anestesiado.
5. Realizar uma incisão mediana abdominal separando a pele eo músculo em duas etapas para abrir o abdômen.
6. Coloque o intestino em uma luva de pó aquecido salina hidratada livre. Dobre a luva ao redor do intestino para evitar a perda de umidade.
7. Remover o tecido gorduroso que cobre a aorta abdominal.
8. Dissecar a aorta formam a região infra-renal até a bifurcação, cuidado para não causar danos nos ramos dos vasos.
9. Se necessário ramos ligadura da aorta.
10. Primeiro utilize uma pinça microcirúrgica por parte da aorta infra-renal dissecados para parar o fluxo de sangue.
11. Em seguida, coloque uma braçadeira segundo próximo à bifurcação da aorta.
12. Agora que o fluxo sanguíneo é interrompido, retire um pequeno segmento da aorta.
13. Leve o enxerto da aorta do doador, que foi mantida em 0,9% salina estéril no gelo, encurtá-lo para o comprimento adequado e posicioná-lo na brecha.
14. Conectam a aorta do doador para o receptor aorta, realizando sutura prolene 8-0 sutura usando (Ethicon, Norderstedt, Alemanha). Comece com a anastomose término-de-final do crânio.
15. Quando a anastomose término-a-ponta distal terminar, abra cuidadosamente a braçadeira distal.
16. Quando não há sangramento após a abertura da pinça distal, com cuidado abra o grampo craniana. Em caso de sangramento nas suturas, feche o clamp novamente, localizar o sangramento e parar o sangramento usando um ponto único.
17. Deve haver um pulso visível na extremidade distal da aorta.
18. Em seguida mova o intestino volta para o abdômen.
19. Lave o abdome com solução salina estéril pré-aquecido.
20. Feche a camada muscular da parede abdominal com prolene 6-0 sutura (Ethicon, Norderstedt, Alemanha).
21. Use 5-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, Alemanha), sutura contínua para fechar a pele.
22. Enquanto o rato ainda está em anestesia, injetar 4-5mg/kg carprofeno por via subcutânea.
23. Para oferecer analgesia suficiente para este tipo de procedimento, metamizol é adicionado à água potável (50 mg por 100 ml metamizol) para dor medicação por 3 dias após o transplante.

Discussion

Por várias razões encontramos o modelo de transplante ortotópico aórtica de forma mais precisa para investigar o desenvolvimento de TVP em comparação com o modelo de transplante cardíaco heterotópico:
Quanto a técnica cirúrgica, o modelo de transplante aórtica incorpora um método de fácil possível, exigindo apenas o cumprimento de fim-de-final da anastomose, enquanto que o modelo de transplante cardíaco heterotópico pode ser considerado um desafio mais complexo e propenso a erros de habilidades do cirurgião s , exigindo término-lateral-anastomose em dois grandes vasos.

Análise e medição de amostras histológicas é drasticamente facilitada desde vasculopatia transplante pode ser examinado em um único vaso de diâmetro única contrapartida definida em vez de a exploração de numerosos pequenos vasos cardíacos mostrando uma grande variedade no tamanho e na constituição que poderia deficiência o pesquisador na obtenção de objetivos e resultados credíveis. A aorta torácica do destinatário pode servir como controle normal, oferecendo um objeto fácil e confiável de comparação de diâmetro e aspecto morfológico, enquanto no modelo de transplante cardíaco heterotópico é difícil comparar vasos peri-ou miocárdio subjacente a uma grande variabilidade interindividual.

Além destes achados, aloenxertos aórticos não são tão propensos a ruptura alterações histológicas que podem resultar de os procedimentos aplicados cirúrgico. Fibrose ou infarto pode ocorrer em e possivelmente afetar tecidos para transplante heterotópico de coração e vasos embutidos, tornando-os impróprios para a avaliação.

Devido ao seu tamanho e constituição, a aorta é um tema ideal para a investigação simples e exata de remodelação morfológica, bioquímica e molecular dentro de cada uma das três camadas da parede vascular, tais como o grau de espessamento intimal concêntrica, necrose dos miócitos na mídia ou a síntese aumentada de citocinas e fatores de crescimento.

A resposta imune gerada por um enxerto de aorta é fato suficiente para provocar alterações crônicas no transplante, mas foi considerada insuficiente para induzir episódios de rejeição aguda (2). Graças a esta imunogenicidade intermediária do enxerto, não perdeu para o transplante é a rejeição aguda e nenhum tratamento imunossupressor inicial com CsA é necessária. O modelo permite, assim, para investigar os efeitos iniciais de drogas na vasculopatia crônica do enxerto sem a influência ou adulteração por imunossupressão profilática muitas vezes visto em transplantes cardíaco heterotópico (2, 4).

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Surgical microscope (magnification 25x)
Isoflurane
shaver
Provo-Iodine
ice cold 0.9% saline
prewarmed 0.9% sterile saleine
eye ointment
glove
microsurgical scissirs
forceps
clamps
8-0 suture (prolene)
6-0 suture (prolene)
5-0 suture (prolene)
Carprofen
Metamizol
Q-tips