Overview
नेमाटोड को प्रयोगशाला में आसानी से प्रचारित किया जा सकता है-भाग में क्योंकि हर्मेफ्रोडाइट्स आत्म-निषेचन द्वारा पुन: पेश कर सकते हैं। हालांकि, जेनेटिक क्रॉस और अन्य प्रयोगों के लिए बड़ी संख्या में पुरुषों की आवश्यकता हो सकती है। यह वीडियो पुरुष सी एलिगेंस के लिए समृद्ध करने की विधि का वर्णन करता है।
Protocol
यह प्रोटोकॉल सिंगारावेलू एट अल, आइसोलेशन और इन विट्रो एक्टिवेशन ऑफ कैनोरहैब्डिटिस एलिगेंस स्पर्म, जे विस एक्सपी का एक अंश है। (2011).
1. पुरुष आबादी का संवर्धन
- प्रयोगात्मक आवश्यकता के आधार पर, निम्नलिखित रणनीतियों में से एक को नियोजित करके बड़ी संख्या में पुरुषों को प्राप्त किया जा सकता है:
- एनजीएम प्लेट के केंद्र में वरीयता प्राप्त OP50 के एक छोटे लॉन पर 5 जंगली प्रकार के पुरुषों और 1 हर्मेफ्रोडिट को पार करके जंगली प्रकार के पुरुषों की बड़ी आबादी प्राप्त की जा सकती है। लगभग 50% सफल पीढ़ी जंगली प्रकार के पुरुष होंगे।
- उसे-5(e1490)या उसे-8(e1489)hermaphrodites पुरुषों की बड़ी संख्या में फेंक देते हैं । उसे- 5 और उसे - 8 नर उपजाऊ होते हैं और स्पर्म आकृति विज्ञान और फंक्शन में कोई स्पष्ट दोष नहीं होता है। तो उसे- 5 या उसके- 8 नर जंगली किस्म के पुरुषों के बदले कई प्रयोग ों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
2. पुरुषों की पहचान और अलगाव
- कीड़े की पूंछ आकृति विज्ञान की जांच करें; नर कीड़े की पूंछ गोल है।
- L4 चरण पुरुषों उठाओ और उन्हें ई. कोलाई OP50 के साथ वरीयता प्राप्त एक NGM प्लेट में स्थानांतरित करें और उन्हें एक या दो दिन के लिए बढ़ने दें। हर्मेफ्रोडाइट्स की अनुपस्थिति में बढ़ते ब्रह्मचारी पुरुष शुक्राणु के नुकसान को रोकते हैं और इस प्रकार प्रायोगिक प्रक्रिया के दौरान बड़ी संख्या में शुक्राणु उपलब्ध होंगे।
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