Bereicherung für Männer: Aufrechterhaltung eines Bestands an männlichen C. elegans

Overview

Nematoden können leicht im Labor vermehrt werden - zum Teil, weil sich Hermaphrodite durch Selbstbefruchtung vermehren können.  Jedoch, genetische Kreuze und andere Experimente können eine große Anzahl von Männern erfordern.  Dieses Video beschreibt eine Methode zur Bereicherung für männliche C. elegans.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Singaravelu et al, Isolation und In-vitro-Aktivierung von Caenorhabditis elegans Sperm, J. Vis. (2011).

1. Bereicherung der männlichen Bevölkerung

1. Je nach experimentellem Bedarf kann eine große Anzahl von Männchen durch eine der folgenden Strategien erhalten werden:
   1. große Population von wilden Typ Männchen können durch Kreuzung 5 wilde Typ Männchen und 1 Hermaphrodit auf einem kleinen Rasen von OP50 in der Mitte der NGM Platte gesät erhalten werden. Ungefähr 50% der nachfolgenden Generation werden wilde Männchen sein.
   2. him-5(e1490) oder him-8(e1489) hermaphrodites werfen eine große Anzahl von Männchen. er-5 und er-8 Männchen sind fruchtbar und es gibt keinen offensichtlichen Defekt in SpermienMorphologie und Funktion. So, er-5 oder er-8 Männchen können anstelle von wilden Typ Männchen für viele Experimente verwendet werden.

2. Identifizierung und Isolierung von Männern

1. Untersuchen Sie die Schwanzmorphologie von Würmern; der Schwanz des männlichen Wurms ist abgerundet.
2. Wählen Sie L4-Bühnenmännchen und übertragen Sie sie auf eine NGM-Platte, die mit E. coli OP50 gesät ist, und lassen Sie sie für ein oder zwei Tage wachsen. Wachsende zölibatäre Männchen in Abwesenheit von Hermaphroditen verhindern den Verlust von Spermien und damit eine große Anzahl von Spermien würde während des experimentellen Verfahrens zur Verfügung stehen.