Berikende for menn: Opprettholde et lager av mannlige C. elegans

Overview

Nematoder kan forplantes lett i lab-in delen fordi hermafroditter kan reprodusere ved selvbefruktning.  Imidlertid kan genetiske kryss og andre eksperimenter kreve et stort antall menn.  Denne videoen beskriver en metode for å berike for mannlige C. elegans.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Singaravelu et al, Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm, J. Vis. Exp. (2011).

1. Berikelse av mannlig befolkning

1. Avhengig av det eksperimentelle behovet, kan et stort antall menn oppnås ved å bruke en av følgende strategier:
   1. stor populasjon av vill type menn kan oppnås ved å krysse 5 vill type menn og 1 hermafroditt på en liten plen av OP50 frø i sentrum av NGM-tallerken. Omtrent 50% av den etterfølgende generasjonen vil være villtype menn.
   2. him-5(e1490) eller ham-8(e1489) hermafroditter kaster et stort antall menn. him-5 og ham-8 menn er fruktbare og det er ingen åpenbar feil i sædmorfologi og funksjon. Så, ham-5 eller ham-8 menn kan brukes i stedet for vill type menn for mange eksperimenter.

2. Identifisering og isolering av menn

1. Undersøk halemorfologien til ormer; den mannlige ormens hale er avrundet.
2. Velg L4-trinns menn og overfør dem til en NGM-platefrø med E. coli OP50 og la dem vokse for en dag eller to. Voksende sølibathanner i fravær av hermafroditter forhindrer tap av sæd og dermed vil et stort antall spermatider være tilgjengelig under eksperimentell prosedyre.