दो फोटॉन लेजर एक्सोटॉमी: ज़ेब्राफिश भ्रूण में एक्सॉन को घायल करने और एक्सोनल रिकवरी का निरीक्षण करने के लिए एक विधि

Abstract

स्रोत: ओ ब्रायन जी एस, एट अल । दो फोटॉन एक्सोटॉमी और समय-चूक कॉन्फोकल इमेजिंग लाइव जेब्राफिश भ्रूण में। जे विस एक्सप्रेस। (2009).

इस वीडियो में दो फोटॉन लेजर एक्सोटॉमी का उपयोग करके जेब्राफिश भ्रूण में अक्षों को घायल करने और चोट से अक्षीय वसूली को देखते हुए विधि का वर्णन किया गया है।

Protocol

1: एक कस्टम का उपयोग कर दो फोटॉन axotomy एक गिरगिट Ti-नीलमणि लेजर के साथ दो फोटॉन माइक्रोस्कोप का निर्माण

1. इमेजिंग के लिए तैयार करें। एक स्लाइड धारक पर माउंटेड भ्रूण (एस) को माइक्रोस्कोप के नीचे रखें। एक 40X (0.8 एनए) पानी उद्देश्य के साथ एक भ्रूण पर ध्यान केंद्रित। लेजर चालू करें। हम निम्नलिखित मापदंडों का उपयोग करके न्यूरॉन्स को व्यक्त करते हुए जीएफपी को पुन: कल्पना और क्षति पहुंचाने में सक्षम हैं। एक गैर हानिकारक शक्ति पर अक्षतंतु कल्पना करने के लिए, 910 नैनोमीटर (एनएम) की एक तरंग दैर्ध्य के लिए लेजर सेट और 30 मिलीवाट की शक्ति (mW सूचीबद्ध नमूने पर बिजली की मात्रा हैं)। इमेजिंग सॉफ्टवेयर खोलें। हम करेल स्वोबोडा की प्रयोगशाला में विकसित स्कैनइमेज सॉफ्टवेयर ....