Zebra Balığı Kardiyomiyopati Modeli: İlaç Kaynaklı Kardiyotoksikite

Overview

Bu video, deneysel gruplar arasında minimum varyasyona sahip bir zebra balığı kardiyomiyopati modeli oluşturma tekniğini açıklar ve örnekte, ilaç doxorubicin kullanarak zebra balığı kardiyomiyopati modeli oluştururuz.

Protocol

1. Yetişkin Balıklarda DOX Enjeksiyonu

1. İçinde sünger olan 100 mm'lik temiz bir Petri kabını diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin, ardından odağı ayarlayın. Bir balığı tutmak için yaklaşık 4 cm uzunluğunda bir boşluk yapmak için süngeri kesin. Daha büyük bir balık için daha uzun bir boşluk yapın.
2. 10 μL mikro şırınga ile 34 G'lık bir iğne hazırlayın. Şırınga ve borudan kabarcıkları ve blokları çıkarmak için iğneyi 1x HBSS tamponu ile durulayın.
3. Yetişkin balıkları 0.16 mg/mL trikain içeren embriyo suyunda 2 dakika uyuşturun.
   NOT: 5 dakika boyunca uzun süreli anestezi ve ardından DOX enjeksiyonu kolayca balık ölümüne neden olabilir.
4. Süngeri trikain ile embriyo suyuna batırın ve balıkları enjeksiyon için süngere aktarın.
5. IP DOX enjeksiyonu aşağıda açıklanan iki yöntemden birini gerçekleştirin.
   1. Klasik IP enjeksiyonu
      1. Karnı olan balıkları süngerin boşluğuna yerleştirin. İğneyi, balık gövdesine 45° açıyla pelvik yüzgeçler arasındaki orta çizgiye hızla yerleştirin ve yaklaşık 1-2 mm nüfuz edin. Tüm DOX çözümlerini yavaşça bırakın. İğneyi çıkarmadan önce 5 s bekleyin. DOX teslimatını balık karnında görünür kırmızı bir renkle kontrol edin.
   2. Alternatif IP enjeksiyonu
      1. Balığı yanlı olarak ön ön kısmındaki süngerin üzerine yerleştirin. Balığı sol elle künt bir uç toz kullanarak hafifçe stabilize edin ve mikro şırıngayı sağ elle tutun.
      2. İğneyi pelvik yüzgecin üzerindeki yanal çizginin altına, eğim yukarı bakacak şekilde yerleştirin. Saat 7 pozisyonunda 45° açıyla işaret ederek, iğneyi pelvik ve anal yüzgeçler arasında bulunan balık boşluğuna 3-4 mm yerleştirin ve ardından pistonu yavaşça bastırın. DOX teslimatını balık karnında görünür kırmızı bir renkle kontrol edin.
6. Enjekte edilen balıkları, balıkların iyileşmesini sağlamak için taze sistem suyuyla dolu temiz bir geçiş tankına hızlı bir şekilde aktarın. Enjeksiyonlar arasında 1x HBSS tamponu ile iğneyi bir kez durulayın.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish