Modèle de cardiomyopathie du poisson zèbre : Cardiotoxicité induite par la drogue

Overview

Cette vidéo décrit la technique de création d’un modèle de cardiomyopathie du poisson zèbre avec des variations minimales entre les groupes expérimentaux et dans l’échantillon, nous créons le modèle de cardiomyopathie du poisson zèbre en utilisant le médicament doxorubicine.

Protocol

1. Injection de DOX dans les poissons adultes

1. Placez une boîte de Pétri propre de 100 mm avec une éponge à l’intérieur, sous un microscope à dissection, puis ajustez la mise au point. Couper l’éponge pour faire une cavité d’environ 4 cm de longueur pour tenir un poisson. Faire une cavité plus longue pour un plus gros poisson.
2. Préparer une aiguille de 34 G à l’aide d’une micro-seringue de 10 μL. Rincez l’aiguille à l’aide d’un tampon 1x HBSS pour enlever les bulles et les blocs de la seringue et du tube.
3. Anesthésier les poissons adultes dans de l’eau embryonnaire contenant 0,16 mg/mL de tricaine pendant 2 min.
   REMARQUE: Une anesthésie prolongée de plus de 5 minutes suivie d’une injection de DOX peut facilement causer la mort des poissons.
4. Faire tremper l’éponge dans l’eau embryonnaire avec de la tricaine et transférer le poisson sur l’éponge pour injection.
5. Effectuer l’injection IP DOX par l’une ou l’autre des deux méthodes décrites ci-dessous.
   1. Injection IP classique
      1. Placez le poisson avec l’abdomen dans la cavité de l’éponge. Insérez rapidement l’aiguille, avec un angle de 45° au corps du poisson dans la ligne médiane entre les nageoires pelviennes, et pénétrer environ 1-2 mm. Relâchez lentement toute la solution DOX. Attendez 5 s avant de retirer l’aiguille. Vérifiez la livraison dox par une couleur rouge visible dans le ventre du poisson.
   2. Injection IP alternative
      1. Placer le poisson latéralement sur l’éponge avec l’antérieur à droite. Stabilisez doucement le poisson à l’aide d’une extrémité émoussée avec la main gauche, et maintenez la micro-seringue avec la main droite.
      2. Placez l’aiguille sous la ligne latérale au-dessus de la nageoire pelvienne, le biseau orienté vers le haut. Pointant vers la position de 7 heures à un angle de 45°, insérez l’aiguille de 3 à 4 mm dans la cavité du poisson située entre les nageoires pelviennes et anales, puis déprimez lentement le piston. Vérifiez la livraison dox par une couleur rouge visible dans le ventre du poisson.
6. Transférez rapidement le poisson injecté dans un réservoir de croisement propre rempli d’eau douce du système pour permettre au poisson de récupérer. Rincer l’aiguille une fois avec 1x tampon HBSS entre les injections.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish