제브라피시 심근병증 모델: 약물 유발 심폐 독성

Overview

이 비디오는 실험 군 과 샘플 중 최소한의 변화와 제브라 피시 심근 병증 모델을 만드는 기술을 설명하고, 우리는 약물 독소루비신을 사용하여 제브라피시 심근 병증 모델을 만듭니다.

Protocol

1. 성인 물고기에 DOX 주입

1. 깨끗한 100mm 페트리 접시에 스폰지를 넣고 해부 현미경 아래에 배치한 다음 초점을 조정합니다. 스폰지를 잘라 서 약 4 cm 길이의 구멍을 만들 어 류를 잡아. 더 큰 물고기에 대한 더 긴 구멍을 확인합니다.
2. 10 μL 마이크로 주사기로 34 G 바늘을 준비합니다. 1x HBSS 버퍼로 바늘을 헹니 주사기와 튜브에서 거품과 블록을 제거합니다.
3. 배아 물에서 성인 물고기를 2 분 동안 0.16 mg /mL 트리카인을 함유하여 마취합니다.
   참고: DOX 주입에 이어 5 분 이상 장기간 마취하면 물고기 사망을 쉽게 유발할 수 있습니다.
4. 트리카인으로 배아 물에 스폰지를 담그고 물고기를 스폰지에 전달하여 주사를 처리합니다.
5. 아래에 설명된 두 가지 방법 중 하나에 의해 IP DOX 주입을 수행합니다.
   1. 클래식 IP 주입
      1. 스폰지의 구멍에 복부와 물고기를 배치합니다. 바늘을 45° 각도로 체어 본체에 골반 지느러미 사이의 중간선에 빠르게 삽입하고 약 1-2mm를 관통합니다. 모든 DOX 솔루션을 천천히 해제합니다. 바늘을 꺼내기 전에 5 s를 기다립니다. 물고기 뱃속에 보이는 붉은 색으로 DOX 배달을 확인하십시오.
   2. 대체 IP 주입
      1. 물고기를 오른쪽에 앞쪽으로 스폰지에 측면으로 놓습니다. 왼손으로 무딘 끝 집게를 사용하여 물고기를 부드럽게 안정시키고 오른손으로 마이크로 주사기를 잡습니다.
      2. 바늘을 골반 지느러미 위에 놓고 벨이 위로 향합니다. 45° 각도에서 7시 위치를 가리키고, 바늘을 골반과 항문 지느러미 사이에 있는 물고기 구멍에 3-4mm를 삽입한 다음 플런저를 천천히 우울하게 합니다. 물고기 뱃속에 보이는 붉은 색으로 DOX 배달을 확인하십시오.
6. 주입된 물고기를 신선한 시스템 물로 채워진 깨끗한 횡단 탱크로 빠르게 옮겨 물고기가 회복할 수 있도록 합니다. 주사 사이에 1x HBSS 버퍼로 바늘을 한 번 헹.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish