Modello di cardiomiopatia zebrafish: cardiotossicità indotta da farmaci

Overview

Questo video descrive la tecnica di creazione di un modello di cardiomiopatia zebrafish con variazioni minime tra i gruppi sperimentali e nel campione creiamo un modello di cardiomiopatia zebrafish utilizzando il farmaco doxorubicina.

Protocol

1. Iniezione DOX nel pesce adulto

1. Posizionare una piastra di Petri pulita da 100 mm con una spugna al suo interno, sotto un microscopio a dissezione, quindi regolare la messa a fuoco. Tagliare la spugna per fare una cavità di circa 4 cm di lunghezza per tenere un pesce. Crea una cavità più lunga per un pesce più grande.
2. Preparare un ago da 34 G con una micro siringa da 10 μL. Risciacquare l'ago con 1 tampone HBSS per rimuovere eventuali bolle e blocchi dalla siringa e dai tubi.
3. Anestetizzare il pesce adulto in acqua embrionale contenente 0,16 mg/mL di tricaina per 2 min.
   NOTA: L'anestesia prolungata superiore a 5 minuti seguita dall'iniezione DOX può facilmente causare la morte del pesce.
4. Immergere la spugna in acqua embrionale con tricaina e trasferire il pesce sulla spugna per iniezione.
5. Eseguire l'iniezione IP DOX con uno dei due metodi descritti di seguito.
   1. Iniezione IP classica
      1. Posizionare il pesce con l'addome nella cavità della spugna. Inserire rapidamente l'ago, con un angolo di 45 ° sul corpo del pesce nella linea mediana tra le pinne pelviche, e penetrare circa 1-2 mm. Rilasciare lentamente tutta la soluzione DOX. Attendere 5 s prima di estrarre l'ago. Controlla la consegna dox con un colore rosso visibile nella pancia del pesce.
   2. Iniezione IP alternativa
      1. Posizionare il pesce lateralmente sulla spugna con la parte anteriore a destra. Stabilizzare delicatamente il pesce usando una forza smussata con la mano sinistra e tenere la microsiringa con la mano destra.
      2. Posizionare l'ago sotto la linea laterale sopra la pinna pelvica, con la smussatura rivolta verso l'alto. Puntando la posizione a ore 7 con un angolo di 45°, inserire l'ago di 3-4 mm nella cavità del pesce situata tra le pinne pelviche e anale, quindi deprimere lentamente lo stantuffo. Controlla la consegna dox con un colore rosso visibile nella pancia del pesce.
6. Trasferire rapidamente il pesce iniettato in un serbatoio di attraversamento pulito pieno di acqua di sistema fresca per consentire al pesce di riprendersi. Risciacquare l'ago una volta con 1 tampone HBSS tra le iniezioni.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish