Sebrafisk Kardiomyopati Modell: Legemiddelindusert kardiotoksisitet

Overview

Denne videoen beskriver teknikken for å lage en sebrafisk kardiomyopatimodell med minimale variasjoner blant eksperimentelle grupper, og i prøven lager vi sebrafisk kardiomyopatimodell ved hjelp av stoffet doxorubicin.

Protocol

1. DOX injeksjon i voksen fisk

1. Plasser en ren 100 mm Petri-tallerken med en svamp inni, under et disseksjonsmikroskop, og juster deretter fokuset. Klipp svampen for å lage et hulrom på ca 4 cm i lengden for å holde en fisk. Lag et lengre hulrom for en større fisk.
2. Forbered en 34 G kanyle med en 10 μL mikrosprøyte. Skyll kanylen med 1x HBSS buffer for å fjerne eventuelle bobler og blokker fra sprøyten og slangen.
3. Bedøv voksenfisken i embryovann som inneholder 0,16 mg/ml trikain i 2 min.
   MERK:Langvarig bedøvelse over 5 minutter etterfulgt av DOX-injeksjon kan lett forårsake fiskedød.
4. Bløtlegg svampen i embryovann med trikain, og overfør fisken til svampen til injeksjon.
5. Utfør IP DOX-injeksjon ved hjelp av en av de to metodene som er beskrevet nedenfor.
   1. Klassisk IP-injeksjon
      1. Plasser fisken med magen opp i svampens hulrom. Sett raskt nålen, med en 45° vinkel til fiskekroppen inn i midtlinjen mellom bekkenfinnene, og penetrer ca 1-2 mm. Slipp alle DOX-løsninger langsomt. Vent i 5 s før du trekker ut nålen. Kontroller DOX-leveransen med en synlig rød farge i fiskemagen.
   2. Alternativ IP-injeksjon
      1. Plasser fisken sidelengs på svampen med fremre til høyre. Stabiliser fisken forsiktig ved hjelp av en stump ende tang med venstre hånd, og hold mikrosprøyten med høyre hånd.
      2. Plasser nålen under sidelinjen over bekkenfinnen, med skråkanten vendt opp. Pek på klokken 7 i en 45° vinkel, sett nålen 3-4 mm inn i fiskehulen som ligger mellom bekkenet og analfinnene, og trykk deretter stempelet sakte ned. Kontroller DOX-leveransen med en synlig rød farge i fiskemagen.
6. Overfør raskt den injiserte fisken til en ren kryssingstank fylt med ferskvann for å la fisken komme seg. Skyll kanylen én gang med 1x HBSS-buffer mellom injeksjonene.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish