链球菌素治疗：1型糖尿病的斑马鱼模型

Overview

该视频描述了在药物链球菌素的帮助下为1型糖尿病患者创建斑马鱼模型的技术，以研究糖尿病并发症和代谢记忆的病理生理学。

Protocol

1. 一代斑马鱼与糖尿病， DM 鱼

1. 准备恢复和麻醉水箱。回收水是正常的鱼水。麻醉水加入足够的2苯氧乙醇，从而在正常鱼水中实现1：1，000稀释。
2. 通过在 2 毫升 0.09% 氯化钠中加入 6 毫克 STZ，并立即将溶液放在冰上，准备 0.3% 的溶液（烟罩中）的链球菌素 （STZ）。这将提供足够的注射溶液，在20分钟内注射约20条鱼。如果您超过 20 分钟标记，请停止，并在继续之前制作新的 STZ 解决方案。在一个单独的管阿里报价足够的盐水溶液控制鱼。一旦 STZ 溶解，所有后续步骤都不需要使用烟气罩。
3. 用 STZ 或控制解决方案填充装有 27 1/2 仪表针的 1/2 cc 注射器，确保没有气泡被困。
4. 将每条鱼单独麻醉，将鱼放入麻醉水中，等待其游泳运动停止（1-2分钟）。
5. 麻醉后，将鱼短暂地放在纸巾上吸收多余的水，将鱼放在称重船上，测量鱼的质量。
6. 将鱼放在牢固的表面（培养皿盖）上注射。
7. 将针头穿过斜面插入腹膜的后部，将 STZ 或控制溶液注入鱼的腹腔中。
8. 0.35毫克/克（350毫克/千克）的STZ应交付给每条鱼，所需的0.3%溶液的体积可按以下方式计算。
   1. 将鱼质量 （g） 乘以 0.35，以产生毫克所需的 STZ 量。
   2. 将上述产品除以 3，以产生注入 μl 所需的 0.3% 溶液的体积。
      示例：对于 0.5 克鱼： a） 0.5 x 0.35 = 0.175 b） .0175/3 = 0.058 毫升 = 58 μl。
      没有 STZ 的相同体积将被注入控制鱼。应生成一张每鱼质量注入体积的表，并用于快速参考。
9. 注射后将鱼放在回收水箱中，并监测它们正常游泳活动。一旦实现这一点，鱼被转移到一个正常的生活水箱，保持在22°C - 24°C的降低温度范围。 这种降低的温度对于有效诱导高血糖（糖尿病，DM）至关重要。
10. 虽然在第一次注射后24小时内检测到高血糖，但为了诱发长期高度血糖状态，斑马鱼需要频繁注射诱导阶段，然后每周进行维护注射，如下所示。

第1周：3次注射（第1天、第3天、第5天）、第2周：1次注射（第12天）、第3周：1次注射（第19天）、第4周（第21天）进行兴趣测定。

在这一点上，斑马鱼被认为是在高血糖的长期状态，并表现出视网膜病变，肾病和损害鳍再生的糖尿病并发症。这些被称为DM鱼。此外，如果需要，鱼可以保持在高血糖状态与每周维护注射。在此过程中，预计约有5%的死亡。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Streptozocin	Sigma Aldrich	S0130
2 phenoxyethanol	Sigma Aldrich	P1126
Scalpel (size 10)	Fisher Scientific	089275A
Petri Dishes	Fisher Scientific	08-757-13
½ cc syringe, with 27 1/2 gauge needle	Fisher Scientific	305620
Sodium Chloride	Sigma Aldrich	S3014
Dissecting Microscope	Nikon	TMZ-1500	Any dissecting microscope is fine.