טיפול בסטרפטוזוצוצין: דג זברה של סוכרת מסוג 1

Overview

וידאו זה מתאר את הטכניקה של יצירת מודל זברה עבור סוכרת מסוג 1 בעזרת התרופה סטרפטוזוצין, כדי ללמוד את הפתופיזיולוגיה של סיבוכים סוכרתיים וזיכרון מטבולי.

Protocol

1. דור של דגי זברה עם סוכרת, DM דגים

1. הכינו גם התאוששות וגם מיכלי מים הרדמה. מי התאוששות הם מי דגים רגילים. עבור מים הרדמה להוסיף מספיק 2-פנוקסיאתנול כך דילול 1:1,000 במי דגים רגילים מושגת.
2. הכן פתרון 0.3% (במכסה המנוע אדים) של סטרפטוזוצין (STZ) על ידי הוספת 6 מ"ג STZ ל 2 מ"ל של 0.09% נתרן כלורי ומיד למקם את הפתרון על קרח . זה יספק פתרון הזרקה מספיק להזרקה של כ 20 דגים ב 20 דקות. אם תחרוג מסימן 20 הדקות, עצור ובצע פתרון STZ חדש לפני שתמשיך. בצינור נפרד aliquot תמיסת מלח מספיק עבור דגים שליטה. לאחר STZ הוא solubilized כל השלבים הבאים אינם דורשים שימוש מכסה המנוע אדים.
3. מלא מזרק 1/2 סמ"ק מצויד במחט מד 27 1/2 עם STZ או פתרונות בקרה להבטיח כי אין בועות אוויר לכודים.
4. הרדמה כל דג בנפרד על ידי הנחת הדג במים הרדמה, ולחכות עד תנועת השחייה שלהם מפסיקה (1-2 דקות).
5. לאחר שהרדימו בקצרה את הדגים על מגבת נייר כדי לספוג מים עודפים, מניחים את הדגים בסירת שקילה ומודדים את מסת הדג.
6. מניחים את הדג על משטח מוצק (מכסה צלחת פטרי) להזרקה.
7. להזריק את STZ או פתרון שליטה לתוך חלל הצפק של הדג על ידי החדרת המחט בעבר את השופעה לתוך ההיבט האחורי של הצפק הגחוני.
8. 0.35 מ"ג/גרם (350 מ"ג/ק"ג) של STZ צריך להיות מועבר לכל דג ואת נפח הפתרון 0.3% הנדרש ניתן לחשב באופן הבא.
   1. להכפיל את המסה של דגים (g) על ידי 0.35 כדי להניב את כמות STZ ב מ"ג נדרש.
   2. לחלק את המוצר שנוצר לעיל על ידי 3 כדי להניב את נפח הפתרון 0.3% הנדרש להזרקה ב μl.
      דוגמה: עבור דג 0.5 גרם : א) 0.5 x 0.35 = 0.175 b) .0175/3= 0.058 מיליליטר = 58 μl.
      אותו נפח ללא STZ יוזרק לדג בקרה. גיליון עבור כרכים להזריק לכל מסה דגים יש ליצור ולהשתמש לעיון מהיר.
9. לאחר ההזרקה מניחים את הדגים במיכל המים להתאוששות ומנטרים אותם לפעילות שחייה רגילה. ברגע שזה הושג הדגים מועברים למיכל חי רגיל המתוחזק בטווח הטמפרטורות המופחת של 22 מעלות צלזיוס - 24 מעלות צלזיוס. טמפרטורה מופחתת זו היא קריטית עבור אינדוקציה יעילה של היפרגליקמיה (סוכרת, DM).
10. למרות היפרגליקמיה מזוהה בתוך 24 שעות של הזריקה הראשונה, על מנת לגרום למצב ממושך של היפרגליקמיה גבוהה מאוד הזברה דורשים שלב אינדוקציה הזרקה תכופה ואחריו זריקות תחזוקה שבועיות כפי שמוצג להלן.

שבוע 1: 3 זריקות (יום 1, 3, 5), שבוע 2: 1 הזרקה (יום 12), שבוע 3: 1 הזרקה (יום 19), שבוע 4: (יום 21) לבצע בדיקה של עניין.

בשלב זה דג הזברה נחשבים במצב ממושך של היפרגליקמיה ומציגים את הסיבוכים הסוכרתיים של רטינופתיה, נפרופתיה וגם התחדשות סנפיר לקויה. אלה מכונים דגי DM. בנוסף, אם תרצה הדג יכול להישמר במצב היפרגליקמי עם זריקות תחזוקה שבועיות. כ 5% מוות במהלך תהליך זה יש לצפות.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Streptozocin	Sigma Aldrich	S0130
2 phenoxyethanol	Sigma Aldrich	P1126
Scalpel (size 10)	Fisher Scientific	089275A
Petri Dishes	Fisher Scientific	08-757-13
½ cc syringe, with 27 1/2 gauge needle	Fisher Scientific	305620
Sodium Chloride	Sigma Aldrich	S3014
Dissecting Microscope	Nikon	TMZ-1500	Any dissecting microscope is fine.