Summary
Здесь мы опишем ортотопической крысы задних конечностей трансплантации процедура, которая, кажется, золотой стандарт
Abstract
Композитный аллотрансплантации ткани (CTA) в настоящее время представляет действующий терапевтический выбор после потери кисти, предплечья или цифр и стала новая терапевтическая лица в восстановительной хирургии. Тем не менее, долгосрочные высокие дозы множественной лекарственной иммуносупрессивной терапии требуется для обеспечения выживания трансплантата, учитывая риск серьезных побочных эффектов, которые поводов более широкое применение. Дальнейшее прогрессирование в этой области может зависеть от лучшего понимания фундаментальной иммунологии и ишемии реперфузии в составных трансплантатов тканей.
На сегодняшний день ортотопической задних конечностей трансплантации у крыс была предпочтительной моделью для грызунов реконструктивной пересадки (RT), тем не менее, это чрезвычайно требовательный процедура, которая требует чрезвычайных навыков микрохирургических для прикрепления сосудистой, костей, мышц и нервов.
Мы ввели сосудистой техники анастомоза манжеты к этой модели, что обеспечивает быстрый и надежный подход к крысе задних трансплантации конечностей. Этот метод упрощает и ускоряет хирургические процедуры и позволяет хирургам с основными опыт микрохирургической успешно выполнять работу с высокой выживаемости и низкий уровень осложнений. Техники, кажется, хорошо подходит для иммунологических, а также ишемии реперфузии (ИРИ) исследований.
Protocol
Операция доноров и задних конечностей Harvest
- Для оперативного процедуры стерильный набор микрохирургических инструментов используется. Хирург должен носить надлежащую одежду в том числе стерильные перчатки, которые должны быть изменены до начала хирургического вмешательства.
- Крыса под наркозом с внутрибрюшинного введения фенобарбиталом (50mg/kg IP) и помещены на спине на нагревают в полевых условиях, что способствует стабильной температуры тела животного в течение всего хирургического вмешательства.
- До рассечения кожи подали работы является продезинфицировать три раза с обоими, дезинфицирующих и алкоголя. Для предотвращения животных роговицы от пересыхания, глаза смазываются мазью глазной (Vidisic) до операции.
- Разрез кожи производится через правый пах примерно на уровне паховой связки. Бедренных сосудов расчленены бесплатно с биполярным прижиганием и тупой диссекции, глубокие ветви лигировали с 8-0 шелка.
- 300 мкл (50 ЕД) гепарина вводят через вены полового члена для анти-коагуляции.
- Бедренные кровеносные лигируют на уровне паховой связки и сократить дистальнее лигатуры.
- Задние конечности промывается ледяной (4 ° С) HTK решение (5 мл) через бедренную артерию в течение 5 минут.
- Все группы мышц резко разделились с ножницами и остеотомия производится с вращающихся электрических увидел на уровне нижней трети бедра.
- Собрано конечности, затем погружен в 20 мл ледяной решение HTK для сохранения и холодного хранения до трансплантации.
Получатель Эксплуатация и трансплантации
- Крыса под наркозом с внутрибрюшинного введения фенобарбитала и помещены на спине на операции на местах.
- Разрез кожи производится через правый пах примерно на уровне паховой связки. Бедренных сосудов расчленены бесплатно с биполярным прижиганием и тупой диссекции.
- Бедренные кровеносные лигируют как дистальной насколько возможно, но проксимальнее эпигастральной взлета судна. Сосудистые зажимы находятся на уровне паховой связки на артерии и вены.
- Полиэтиленовые манжеты натягивается артерии (внутри манжеты диаметром: 0,912 мм, манжета-Толщина стенки: 0,010 мм, длина манжета: 2,0 мм) и вены (внутри манжеты диаметром 1,151 мм, манжета-Толщина стенки: 0,010 мм, длина манжета : 2,0 мм). Край просвет сосуда, затем вытащил с судна расширитель и бедренную артерию и вены вывернутые по всему телу от манжеты (примерно 2 мм) и фиксируется с окружной 8-0 шелковые лигатуры.
- Чтобы освободить место для доноров конечностей получателя конечностей снимается с острыми рассечение мышечных групп и остеотомия выполняется на середине бедра.
- Доноров конечности удаляют из раствора HTK и трансплантации начинается с остеосинтез бедренной кости использованием 18-игла (длина 1,5-2,0 см), как интрамедуллярного стержня.
- Брюшной групп мышц тесно приближается с 4-0 Викрил или Prolene узловыми швами.
- Сосудистые анастомозы выполняются, потянув вену донора и артерии более получателей вены и манжеты комплекса. Окружная 8-0 шелковой лигатурой снова помещен в безопасное анастомоза.
- Венозный зажим выпущен следуют артериальной зажим, и реперфузии визуализируется возвращение цвет дистальных конечностей и ног, а также пульсирующий поток через артерии.
- Остальные спинной группы мышц повторно аппроксимируются 4-0 Викрил или Prolene узловыми швами.
- Кожа закрыта с 4-0 Викрил или проленовой узловыми швами.
- Получатель крыса помещается на грелку и тщательно контролировать до выздоровления.
- Получатель животные получают профилактическое назначение антибиотиков (Цефазолин, 20 мг / сут, IM) и Buprenex (0,1 мг / кг, Южная Каролина) в течение трех дней после трансплантации.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Десятилетия экспериментального исследования предшествовали и позволили успешную трансплантацию человеческого стороны в недавнем прошлом. В 1978 году Шапиро и др.. разработаны ортотопической задних модель трансплантации конечностей у крыс, хорошо подходит для изучения различных патологических, физиологических и иммунологических аспектов, а также функциональные результаты составных трансплантатов тканей. Мы модифицировали наиболее сложной частью процедуры, а именно сосудистого анастомоза, путем введения не-шовные манжеты техники. По сравнению с обычной техникой шва это упрощает и ускоряет хирургические процедуры и позволяет хирургам с основными опыт микрохирургической проводить процедуры с высокой выживаемости (80-90%).
Без изменчивости зашивается анастомозы, риск кровотечения, тромбоза и перегибов на ножке уменьшаются. Сужение или турбулентности в месте, где кровь сначала сталкивается с просветом, проходящих через манжета нового потенциального риска манжеты технику, хотя это может быть сведено к минимуму с соответствующим выбором размера манжеты. Кроме того, небольшие несоответствия размера могут быть легко обращаться с манжетой анастомоза, опять же снижение риска, связанного с ушиванием судов различного диаметра. Некоторые из наиболее важных соображений для успешного анастомоза манжеты, приведены ниже:
- Однократное введение фенобарбитала (50 мг / кг IP) должна быть достаточной для обезболивания животных в течение 90 минут. В случае, если операция длится более 70-80 минут дополнительная доза 15мг/кг IP должен быть применен. Глубина анестезии могут быть проверены во время операции, повторяя ног-пинча рефлекс испытания.
- Остеотомия доноров задних конечностей / получателя задние конечности должны быть выполнены на середине бедра, чтобы облегчить остеосинтеза при пересадке.
- Тщательный подбор манжеты размеров имеет решающее значение для успешной реваскуляризации.
- Чтобы избежать тромбозов, гепарин (50IU) следует назначать доноров 1 минуту до трансплантата перфузии.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Nembutal® | OVATION Pharmaceuticals | ||
| Heparin Immuno | Ebewe Pharma | ||
| Custodiol HTK Solution | Essential Pharmaceuticals | ||
| Adventitia Scissors | ASSI | ASSI®SAS-21 R-8T | |
| Forceps | ASSI | ASSI®JFC-7 | |
| Dilator Forceps | ASSI | ASSI®D-5AZ | |
| Polymide Tubes | River Tech Medical | #17; #19 |
References
- Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J Surg Res. 24 (6), 501-506 (1978).
- Petruzzo, P. The international registry on hand and composite tissue transplantation. Transplantation. 86 (4), 487-492 (2008).
- Schneeberger, S. First forearm transplantation: outcome at 3 years. Am J Transplant. 7 (7), 1753-1762 (2007).
