Summary
Pseudofracture, बाँझ musculoskeletal आघात के एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य murine मॉडल, देर अवधि के बाद अभिघातजन्य प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है. इस अनुच्छेद के कदम से कदम मॉडल के प्रक्रियात्मक निष्पादन एकाधिक आघात के अध्ययन की अनुमति प्रयोगात्मक मॉडल के संयोजन के लिए संभावित सहित, का वर्णन करता है.
Protocol
1. साधन और सर्जिकल फील्ड तैयार:
सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग कर प्रदर्शन कर रहे हैं. शुरुआत से पहले, प्रयोगात्मक क्षेत्र अच्छी तरह से और साफ होना चाहिए निष्फल. benchtop, कीटाणुरहित किया जाना चाहिए तो हवा शुष्क और 70% शराब के साथ नीचे नष्ट करने की अनुमति दी. एक शल्य नीले पैड और बाँझ क्षेत्र प्रयोगात्मक कार्य क्षेत्र में ड्रेसिंग रखें.
सभी सामग्री और उपकरणों आटोक्लेव उपयोग करने से पहले निष्फल रहे हैं. सीरिंज और सुई बाँझ प्राप्त कर रहे हैं. शोधकर्ता उचित प्रयोगशाला कोट, सर्जिकल मास्क, और बाँझ सर्जिकल दस्ताने में garbed होना चाहिए.
हमारे सर्जिकल उपकरणों आटोक्लेव हर शाम निष्फल रहे हैं. वे जीवाणुरोधी साबुन और पानी का उपयोग सर्जरी के बाद धो रहे हैं. वे एक स्वच्छ शल्य नीले पैड पर सूखे की अनुमति दी हैं. वे तो ध्यान बंध्याकरण पाउच में रखा और बाद में उपयोग के लिए निष्फल.
गर्म मनका अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ पर मुड़ें करने के लिए सुनिश्चित करें के लिए यह उपयुक्त तापमान तक पहुँच 300-350 ° प्रयोग शुरू करने से पहले फा. इस अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ करने के लिए संबंधित चूहों पर प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के बीच उपकरणों को साफ करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा. एक स्टेनलेस स्टील के साधन ट्रे जाओ और 70% इथेनॉल के साथ रास्ते से 1 / 3 से भरने. वहाँ पर्याप्त 70% इथेनॉल के लिए अपने शल्य चिकित्सा उपकरणों को कवर किया जाना चाहिए. परिसंचारी हीटिंग पैड पर मुड़ें और इसे पर एक शल्य नीले पैड और फिर उस के शीर्ष पर एक बाँझ ड्रेसिंग क्षेत्र जगह है. यह हीटर प्रयोगात्मक प्रक्रिया और वसूली अवधि के दौरान माउस के पर्याप्त गर्मी को सुनिश्चित करने के लिए प्रयोग किया जाता है. सभी बाँझ उपकरणों, धुंध, सिरिंजों, सुई और एक 1.5mL microfuge ट्यूब बाँझ क्षेत्र ड्रेसिंग पर रखें. सावधान रहो, जब किसी भी बाँझ उपकरणों और अन्य वस्तुओं को खोलने के लिए, उन्हें छू द्वारा उन्हें दूषित नहीं करते. यह सबसे अच्छा है बाँझ दस्ताने का उपयोग करें जब इस सेटअप प्रक्रिया कर रही है.
2. Pseudofracture मॉडल - प्रायोगिक प्रक्रिया:
1. संज्ञाहरण और माउस की स्थिति की प्रेरण.
Pentobarbitol की intraperitoneal इंजेक्शन (70mg/kg) प्रशासन द्वारा शुरू करो. यह पहली बार अपने पिंजरे से माउस उठाने इसकी पूंछ के प्रॉक्सिमल अंत का उपयोग करके निपुण है. माउस तब anaesthesic की सही खुराक की गणना तौला जाना चाहिए. अगला, पिंजरे के शीर्ष पर पशु जगह है जबकि अभी भी अपनी पूंछ पकड़. और forepaws पीछे सिर्फ माउस के दोनों तरफ अंगूठे और मध्यम उंगली के साथ माउस के गर्दन के कूड़ा ले लो. तर्जनी / क्षेत्र सिर, गर्दन पर त्वचा वापस खींच करने के लिए प्रयोग किया जाता है और आंशिक रूप से सिर स्थिर. माउस पूंछ छोटी उंगली और अनामिका के बीच आयोजित किया जाता है जबकि अनामिका माउस रीढ़ की काठ का क्षेत्र में दबाया जाता है. संज्ञाहरण पूर्ण प्रभाव लगभग 5 मिनट के भीतर ले, और चाहिए पलटा परीक्षण के साथ पुष्टि की जानी चाहिए.
बाद जानवर सो रहा है, ढालुआं स्थिति में एक Plexiglass बोर्ड पर माउस और जगह एक ढीला पाश टेप तकनीक का उपयोग करने के लिए उन्हें उनके extremities टेप द्वारा स्थिर. ढीला पाश तकनीक बस टेप की पतली स्ट्रिप्स में कटौती और टेप प्रत्येक छोर के बाहर भाग के आसपास शिथिल लपेटकर जरूरत पर जोर देता है. टेप तो खुद को वापस अटक और टेप से अधिक बाईं बोर्ड से जुड़ा हुआ है. यह प्रयोगात्मक रूप में के रूप में अच्छी तरह से एक सुसंगत तरीका चूहों के extremities सुनिश्चित करने में किया जा हेरफेर की अनुमति देता है एक और प्राकृतिक स्थिति मान. जानवर, पेट, वंक्षण, और जांघ क्षेत्रों में तो हमारे Oster A5 (आकार 40 ब्लेड) कतरनी, का उपयोग करने के लिए एक बाँझ क्षेत्र को बनाए रखने में मदद के बाल काटे हैं. एक 4x4 धुंध betadine के साथ doused है और शल्य चिकित्सा क्षेत्र तो बाँझ सफाया है. एक बाँझ क्षेत्र ड्रेसिंग और फिर जोड़ रहा है केवल कम extremities और सिर के जोखिम की अनुमति के लिए माउस भर में लिपटी.
स्थिरीकरण और नसबंदी के बाद, isoflurane साथ प्रयोगात्मक प्रक्रिया शुरू होने से पहले माउस नाक पर एक नाक शंकु जगह कुछ ही सेकंड के लिए. नाक शंकु एक 50cc शंक्वाकार धुंध के साथ भरा ट्यूब के होते हैं. ट्यूब के नीचे के अंत में आधा काट रहा है माउस नाक में फिट के लिए एक जगह बनाने. एक टोपी (एक ऊतक भंडारण कंटेनर यानी सीधे पक्ष चौड़े मुंह जार के नीचे) शंक्वाकार की कटौती अंत पर रखा गया है करने के लिए सुनिश्चित करें isoflurane वाष्पकणों जब उपयोग में नहीं ट्यूब में रहते हैं. Isoflurane की एक एमएल शंकु के भीतर धुंध के लिए जोड़ा जाना चाहिए. सावधानीपूर्वक ध्यान माउस संज्ञाहरण के उपयोग के दौरान भुगतान किया जाना चाहिए और नाक शंकु के माध्यम से विशेष रूप से isoflurane के उपयोग. एक बार जानवर respirations धीमी गति से शुरू, प्रयोग शुरू करने के लिए, और नाक शंकु और हटाया जाना चाहिए बंद कर सकते हैं.
यदि अतिरिक्त संज्ञाहरण प्रयोग के किसी भी भाग भर में आवश्यक है, अतिरिक्त pentobarbital या इंजेक्शन जा सकता है isoflurane दिलाई. Isofluorane प्रशासन की वैकल्पिक तरीकों उपलब्ध है और अद्यतन दिशानिर्देशों recommएक सटीक vaporizer का उपयोग संज्ञाहरण के बेहतर नियंत्रण की अनुमति है, संभव अगर अंत. हालांकि, इन तरीकों में से किसी के साथ माउस के श्वसन फिजियोलॉजी के लिए करीब ध्यान गारंटी होना चाहिए.
2. Pseudofracture प्रयोग.
छद्म फ्रैक्चर हड्डी घायल मांसपेशियों समाधान इंजेक्शन द्वारा पीछा किया और hindlimbs के लिए द्विपक्षीय प्रदर्शन नरम ऊतक चोट का एक संयोजन है. हड्डी समाधान प्राप्तकर्ता चूहों के किसी भी प्रयोगात्मक हेरफेर से पहले शुरू होता है तैयार रहना चाहिए.
3. अस्थि समाधान तैयारी.
हड्डी एक दाता माउस से तैयार समाधान 3 प्राप्तकर्ता चूहों के लिए पर्याप्त होगा. एक syngeneic दाता माउस का इस्तेमाल किया जा सकता है कि उम्र और प्राप्तकर्ता प्रयोगात्मक माउस के लिए वजन मिलान चाहिए.
दाता माउस साँस isoflurane के साथ euthanized हो जाएगा. दाता तो पैर की नोक पर ही कम extremities टेप करने के लिए सावधान ध्यान के साथ plexiglass बोर्ड टेप हो जाएगा. निचले extremities ध्यान से मुंडा और अच्छी तरह से betadine में शामिल किया गया होना चाहिए, और फिर बाँझपन के लिए शराब के साथ नष्ट. जांध की हड्डी और टिबिअ फिर दोनों कम extremities से शल्य चिकित्सा किया जाएगा एक बाँझ तरीके से हटाया. निचले छोर से लंबी हड्डियों को हटाने के लिए, वंक्षण क्षेत्र में त्वचा में एक शल्य चीरा बनाने के लिए, और सिरा की लंबाई के साथ त्वचा में कटौती, टखने के लिए नीचे जारी है. त्वचा वापस लेना है, और यह चमड़े के नीचे और अधिकतम प्रदर्शन के लिए औसत दर्जे का है और पार्श्व पहलुओं पर दोनों प्रावरणी की मांसपेशी से दूर काटना. मांसपेशियों कि पूर्वकाल और टिबिअ (tibialis पूर्वकाल, extensor digitorum longus, extensor hallicus longus, peroneus longus, peroneus ब्रेविस) ब्लेड proximally और distally मांसपेशियों को सफाई से दूर लिफ्ट स्लाइड और पार्श्व झूठ के तहत एक कैंची की ब्लेड डालें हड्डी अंतर्निहित. टिबिअ (gastrocnemius, soleus, plantaris, पीछे tibialis, flexor digitorum longus, flexor hallicus longus) के नीचे मांसपेशियों को अलग टिबिया के पीछे और औसत दर्जे का underside पर इस तकनीक को दोहराएँ. एक न्यूनतम अतिरिक्त परिश्रम के पीछे पक्ष पर इस्तेमाल किया जाना चाहिए जब distally फिसलने क्रम में fibula टिबिया से दूर तस्वीर. इन पैर की मांसपेशियों के प्रॉक्सिमल अंत में अपने सम्मिलन के रूप में बंद के रूप में संभव tendons कटौती और मांसपेशियों distally वापस लेना है, जबकि नीचे फैशन में पेशी समूह पर एक साथ एक छोटी सी tug टखने संयुक्त से इन मांसपेशियों के बाहर संलग्नक जारी करेंगे खींच. टखने संयुक्त कैंची से सीधे के माध्यम से काटा जा सकता है है. इस बिंदु पर फीमर से टिबिया अलग मत करो! इस संबंध में अतिरिक्त लाभ उठाने देता है कि कूल्हे संयुक्त से फीमर के विच्छेदन में सहायता करेगा. जांध की हड्डी से मांसपेशियों की रिहाई के लिए एक समान तकनीक का पालन करें और इस पीछे और दोनों medially और पार्श्व भी अगर जरूरत प्रदर्शन. इन मांसपेशी समूहों के बाहर का लगाव कट करने के लिए उन्हें संयुक्त घुटने से जारी है. विच्छेदन जारी रखें और मांसपेशियों के नीचे का पालन करें कूल्हे संयुक्त के बाहर फीमर के अंत काटना. इस विच्छेदन में सहायता, त्वचा चीरा तक के रूप में करने के लिए पर्याप्त जोखिम को प्राप्त करने के लिए आवश्यक के रूप में बढ़ाया जाना चाहिए. कूल्हे संयुक्त में फीमर प्रस्ताव विच्छेदन के दौरान जांध की हड्डी के प्रॉक्सिमल अंत का पता लगाने में मदद कर सकते हैं.
एक बार फीमर (संलग्न टिबिअ के साथ) दाता माउस से हटा दिया जाता है उन्हें एक बाँझ 4x4gauze पर जगह. दो हड्डियों बस एक अलग हाथ में प्रत्येक हड्डी लोभी और धीरे घुमा / विपरीत दिशाओं में अपने लंबे अक्ष के साथ दो हड्डियों घूर्णन से संयुक्त घुटने में विभाजित किया जा सकता है. कोमल और इन दो हड्डियों के विच्छेदन से निपटने के रूप में वे आसानी मैनुअल हेरफेर के किसी भी अधिक परिश्रम के साथ खंडित किया जा सकता है की सिफारिश की है. लंबी हड्डियों से शेष कण्डरा संलग्नक को हटाने के लिए, 4x4 धुंध का एक सूखी बाँझ टुकड़ा हड्डी की लंबाई के चारों ओर लिपटा का उपयोग करें. इस धुंध हड्डी के खिलाफ कस मुट्ठी हड्डी कई बार की पूरी लंबाई पुल, इस हड्डी की सतह से दूर शेष ऊतकों परिमार्जन के रूप में वे धुंध का पालन करें और जल्दी और आसानी से हो हड्डियों से दूर खींच लिया जाएगा. हड्डियों को एकत्र तो एक बाँझ 1.5mL microfuge ट्यूब में सीधे चाहिए रखा जाना और परिवहन के लिए बर्फ पर रखा है.
इन चार दाता हड्डियों हड्डी के समाधान के लिए तैयार करने के लिए एक जैविक सुरक्षा कैबिनेट पर ले जाया जाएगा. डाकू अच्छी तरह से उपयोग से पहले कीटाणुरहित किया जाना चाहिए, एक बाँझ हुड के भीतर कार्य क्षेत्र पर ड्रेसिंग क्षेत्र जगह है. कार्य क्षेत्र में एक बाँझ मोर्टार और मूसल, बाँझ 8ml ट्यूब और बाँझ फास्फेट प्लेस खारा (पीबीएस) buffered. एक 1ml pipetteman और संबंधित सुझावों हुड के भीतर उपलब्ध होना चाहिए.
संदंश की एक बाँझ जोड़ी के लिए 1.5mL microfuge ट्यूब से एक बाँझ फैशन में काटा हड्डियों और हटाने मोर्टार में रखा करने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए, मूसल तो धीरे हड्डियों को कुचलने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा. Phosphखाया buffered खारा वाहन के लिए इंजेक्शन के लिए हड्डी के टुकड़े resuspend प्रयोग किया जाता है. पिपेट मोर्टार में पीबीएस की 1ml और शेष टुकड़े को कुचलने के लिए जारी, अतिरिक्त परिपत्र गति के साथ पूरा resuspension सुनिश्चित. फिर पीबीएस के दूसरे 1ml जोड़ने और 'हड्डी समाधान' बनाने की पेराई जारी है. समाधान एक गुलाबी रंग है, और चाहिए कि पूरी तरह नहीं तोड़ा जा सकता है मोर्टार के नीचे छोड़ दिया है अवशेष जाएगा. धीरे धीरे समाधान बाहर डाल 8ml ट्यूब में मोर्टार की अधिकतम मात्रा को पकड़ने, जबकि यह सुनिश्चित करना बड़ा अवशेष पीछे मोर्टार में रहते हैं. यह हड्डी समाधान बर्फ पर अपनी प्रयोगात्मक उपयोग करें जब तक बनी रहती है और इंजेक्शन के लिए 1ml सीरिंज को हस्तांतरित किया जाएगा चाहिए. बाद में एक बीस गेज सुई 1ml हड्डी समाधान युक्त सिरिंज से जुड़ी होगी आदेश में यह माउस के लिए प्रशासन. यह बड़ी सुई आकार करने के लिए सुनिश्चित करें कि सभी हड्डी टुकड़े इंजेक्शन पर क्षेत्र में प्रवेश और सुई ब्लॉक नहीं चुना गया था.
इससे पहले कि प्राप्तकर्ता माउस, हड्डी के समाधान की एक बूंद के लिए इंजेक्शन संस्कृति के लिए एक MacConkey अगर प्लेट (24 48hours के लिए ऊष्मायन) पर रखा गया है. यह हड्डी के समाधान के बाँझपन को सुनिश्चित करने है. हड्डी के समाधान के पीएच भी एक तटस्थ पीएच सुनिश्चित करने के लिए जाँच की जानी चाहिए.
4. नर्म ऊतक चोट.
यह कोमल ऊतक चोट एक द्विपक्षीय hindlimb कुचलने चोट है. माउस की प्रारंभिक स्थिति, हिंद थोड़ा अपहरण और laterally घुमाया अंगों के साथ, सही पेशी समूह, घुटने flexors (मछलियां ग्रीवा, semitendinosus और semimembranosus मांसपेशियों) पहुँच में मदद करता है. एक बड़े 18cm hemostat कुचलने चोट करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा. इन लागू hemostats के बल वितरण का विश्लेषण और 270psi हो Topaq दबाव विश्लेषण प्रणाली का उपयोग सेंसर उत्पाद इंक द्वारा hemostat फीमर साथ पीछे जांघ मांसलता, मध्य के आसपास clamped किया जाना चाहिए अपने उत्तल फीमर का सामना करना पड़ रहा वक्र के साथ पाया था. hemostat तो बंद केवल प्रथम क्लिक से बंद किया जाना चाहिए, और 30 सेकंड के लिए रहते हैं. इस hemostat की नियुक्ति करने के लिए सावधान ध्यान महत्वपूर्ण है - यह फीमर पर clamped नहीं किया जा चाहिए, यह सुनिश्चित नहीं टूटी है. यह चाहिए एक सुसंगत तरीके में प्रत्येक समय चूहों के बीच एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य चोट की गारंटी हो प्रदर्शन. यह कुचलने चोट दोनों कम extremities पर किया जाता है.
5. अस्थि समाधान इंजेक्शन.
प्राप्तकर्ता प्रयोगात्मक माउस anesthetized और तैयार के रूप में पहले वर्णित हो सकता है, और कोमल ऊतक चोट आया होगा इस हड्डी इंजेक्शन से पहले.
हड्डी समाधान तो द्विपक्षीय प्राप्तकर्ता माउस की कुचल जांघ मांसलता में इंजेक्ट किया जाएगा. एक 20 गेज सुई, इस समाधान के 0.15mL का प्रयोग प्रत्येक जांघ के पीछे की मांसपेशियों में अंतःक्षिप्त किया जाएगा. त्वचा के माध्यम से सुई लगभग 2 ~ 3mm दर्ज करें और सुई की प्रविष्टि की दूरी पर ध्यान देना - आप के रूप में बेवल की नोक जांध की हड्डी के खिलाफ सिर्फ छू लगेगा, इस स्थिति में आदर्श है. अब हड्डी समाधान इंजेक्षन. सुई को वापस लेने और जल्दी इंजेक्शन साइट पर एक बाँझ दस्ताने उंगली जगह घाव के बाहर हड्डी समाधान के किसी भी वापस प्रवाह को रोकने. इस उंगली वहाँ कई सेकंड के लिए पकड़ो.
माउस तो पिंजरे में वापस जाएगा रखा जाना और सीधे संज्ञाहरण उतरे के रूप में आंदोलन की पूर्ण स्वतंत्रता की अनुमति दी. उपयुक्त दर्द प्रबंधन के रूप में माउस जागता प्रशासित किया जाना चाहिए.
6. Post-operative/recovery अवधि.
ढीला पाश टेप निकाल दिया है और पशुओं जो कई घंटे के बाद वसूली के लिए एक परिसंचारी हीटिंग पैड पर रखा है एक स्वच्छ पिंजरे में रखा जाता है. एक अतिरिक्त गर्मी दीपक के साथ उपयुक्त गर्मी सुनिश्चित किया जाना चाहिए और यदि आवश्यक हो.
खाद्य और पानी आसानी से उपलब्ध हो जाएगा.
एनाल्जेसिक के रूप में पशुओं संज्ञाहरण से waken क्रम में सही ढंग से दर्द का प्रबंधन शुरू प्रशासित किया जाना चाहिए. Buprenorphine 0.1mg/kg () subcutaneously है इंजेक्शन के रूप में पशुओं को शारीरिक गतिविधि शुरू, लेकिन उससे पहले नहीं, इतनी के रूप में समझौता करने के लिए नहीं श्वसन समारोह.
चूहे लगातार संज्ञाहरण के दौरान निगरानी किया जाना चाहिए संज्ञाहरण या प्रयोगात्मक endpoint से वसूली तक. चूहे भी किया जाना चाहिए बहुत ध्यान से पश्चात की अवधि में निगरानी और किसी भी अतिरिक्त दर्द दवा की आवश्यकता प्रशासित किया जा के रूप में की जरूरत चाहिए. मॉनिटर जानवर शारीरिक गतिविधि, सांस की स्थिति, भोजन, और पानी का सेवन और संकट के किसी भी संकेत (अस्वाभाविक श्वास, दर्द, खाने और पीने की आदतों में परिवर्तन) के अनुसार संबोधित किया जाना चाहिए.
70% शराब में अपने सर्जिकल उपकरणों प्लेस और उन्हें बाँझ धुंध के साथ पोंछ तो उन्हें ~ जानवरों के बीच में नसबंदी के लिए 20 सेकंड के लिए microbead अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ में डाल दिया. शल्य चिकित्सा उपकरणों को निकालें और उन्हें 70% शराब के साथ स्प्रे उन्हें ठंडा करने में मदद. उन्हें सेंट पर रखेंerile क्षेत्र ड्रेसिंग. सुनिश्चित करें कि वहाँ कोई यंत्र है कि वापस अगले पशुओं में ड्रिप पर छोड़ दिया शराब.
3. तुलनात्मक द्विपक्षीय जांध की हड्डी फ्रैक्चर मॉडल - प्रायोगिक प्रक्रिया:
प्रयोगात्मक माउस anesthetized और तैयार के रूप में शुरू में वर्णित किया जाएगा. एक बड़े 18cm hemostat अपने उत्तल घुटने का सामना करना पड़ सतह के साथ संयुक्त घुटने से ऊपर लगभग दो - 3mm hindlimb के आसपास clamped किया जाना चाहिए. Clamped और hemostat hemostat और कूल्हे के बीच अपने सूचकांक उंगली के शीर्ष पर अपने अंगूठे प्लेस. पहले घुमा ताकि आप जानते हैं जहाँ आप तोड़ रहे हैं फीमर महसूस करने के लिए सुनिश्चित करें. फिर मोड़ hemostat वामावर्त जबकि घुमा अपने दूसरे हाथ दक्षिणावर्त.
Contralateral पैर के साथ प्रक्रिया दोहराएँ.
4. एकाधिक ट्रामा मॉडल - रक्तस्रावी शॉक साथ Pseudofracture के संयोजन के लिए प्रायोगिक प्रक्रिया:
प्राप्तकर्ता माउस anesthetized और तैयार के रूप में शुरू में वर्णित किया जाएगा. चूहों कि छद्म फ्रैक्चर के साथ संयोजन में रक्तस्रावी सदमे से गुजरना pseudofracture प्रक्रिया से पहले और्विक धमनी cannulation और फिर इस कैथेटर से hemorrhaged जाएगा एक बार फ्रैक्चर छद्म पूरा हो चुका है.
5. सफलता के लिए रहस्य:
जनरल:
- सुनिश्चित करें कि आप अतिरिक्त के रूप में संभव के रूप में बाँझ रह प्रयास ले.
- माउस के समग्र शारीरिक हालत के लिए सावधानीपूर्वक ध्यान भुगतान किया जाना चाहिए, श्वसन दर सहित, और संज्ञाहरण के प्रशासन के दौरान विशेष रूप से नाक शंकु के माध्यम से isoflurane.
अस्थि समाधान तैयारी:
- हड्डियों की कोमल हेरफेर - सरल मैनुअल हेरफेर के दौरान के रूप में आसानी से किया जा सकता है अधिक परिश्रम के साथ खंडित!
- टिबिअ से fibula हटाने विच्छेदन पर सुनिश्चित किया जाना चाहिए.
- हड्डियों को पहली बार में धीरे से कुचल द्वारा शुरू - इतनी के रूप में मोर्टार के भीतर सभी टुकड़ों को रखने के लिए!
- केवल 1 एमएल पीबीएस शुरू जोड़ें और शेष हड्डी टुकड़े पेराई जारी रखने के लिए, एक बार एक अच्छा निलंबन का गठन किया है, शेष 1ml जोड़ें.
- बिना बड़ा शेष ऊतकों कि पूरी तरह से नीचे नहीं तोड़ा जा सकता है - केवल मोर्टार और मूसल से समाधान हो एकत्र चाहिए इन / ब्लॉक इंजेक्शन पर सुई में प्राप्तकर्ता चूहे में दर्ज हो सकता है.
नर्म ऊतक चोट:
- इस hemostat की सावधानी से स्थान महत्वपूर्ण है - फीमर से अधिक है या नहीं यह खंडित होगा. - प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य चोट के लिए सही मांसलता (घुटने flexors पीछे जांघ) पर hemostat दबाना.
अस्थि समाधान इंजेक्शन:
- जब समाधान इंजेक्शन सुई की प्रविष्टि की दूरी ध्यान देना - आप के रूप में बेवल की नोक जांध की हड्डी के खिलाफ सिर्फ छू लगेगा, इस स्थिति में आदर्श है.
- सुई को वापस लेने और जल्दी इंजेक्शन स्थल पर घाव के बाहर हड्डी समाधान के किसी भी वापस प्रवाह को रोकने के लिए एक उंगली जगह. उंगली वहाँ कई सेकंड के लिए पकड़ो.
6. पोस्ट ऑपरेटिव चिंताएं:
- पैर में संक्रमण के लिए जाँचें.
- हड्डी समाधान संस्कृति की जाँच करें.
- पशु मुसीबत प्रयोगात्मक हेरफेर और जुड़े सूजन का एक परिणाम के के रूप में हिंद अंग का उपयोग हो सकता है. दर्द उचित प्रबंधित.
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Discussion
Pseudofracture, बाँझ musculoskeletal आघात के एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य murine मॉडल, बाद अभिघातजन्य प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है. pseudofracture मॉडल immunologically एक लंबी हड्डी फ्रैक्चर की सुविधाओं के मनोरंजन के माध्यम से एक सिरा फ्रैक्चर पर्यावरण mimics: देशी हड्डी को तोड़ने के बिना घायल मांसपेशियों और कोमल ऊतकों क्षतिग्रस्त हड्डी और अस्थि मज्जा को उजागर कर रहे 38,39 एक biphasic प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के बाद देखा जा सकता है. pseudofracture आघात जो एक प्रारंभिक hyperinflammatory प्रतिक्रिया है कि 6 घंटे देरी प्रतिरक्षादमन की एक दूसरे घटक 48hrs के चारों ओर एक गर्त के रूप में चित्रित द्वारा पीछा चोटी पर देखा जा सकता है है के होते हैं. इस मॉडल के लिए प्रयोगात्मक जैसे अस्थिभंग निर्धारण murine आघात मॉडलिंग जो जटिल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य आसानी से नहीं किया जा सकता है की चुनौतियों में से कुछ पर काबू पाने में मदद करता है. विशेष रूप से इस मॉडल देर बाद अभिघातजन्य प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के शब्द अध्ययन परमिट के रूप में यह देशी हड्डी के फ्रैक्चर के बिना पशुओं में लंबी अवधि के अस्तित्व के लिए अनुमति देता है.
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Disclosures
जानवरों पर प्रयोग संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति और अनुसंधान आचरण और पिट्सबर्ग विश्वविद्यालय, AALAS / AAALAC मान्यता प्राप्त संस्था के अनुपालन कार्यालय द्वारा निर्धारित दिशा निर्देशों और नियमों के अनुसार में प्रदर्शन किया गया. पशु स्रोतों जैक्सन प्रयोगशालाओं और चार्ल्स नदियों प्रयोगशालाओं शामिल हैं. सभी पशुओं के लिए प्रत्येक विक्रेता के माध्यम से व्यापक स्वास्थ्य आश्वासन के रूप में अच्छी तरह के रूप में पिट्सबर्ग के आंतरिक पशु स्वास्थ्य निगरानी कार्यक्रम के विश्वविद्यालय से गुजरना. इस अनुसंधान हड्डीवाला जानवरों के उपयोग के लिए अमेरिकी सरकार के प्रिंसिपलों के साथ अनुसार आयोजित किया जाता है. कार्यक्रम USDA के साथ पंजीकृत है, और प्रयोगशाला पशु कल्याण के सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा कार्यालय के साथ आश्वासन के एक पत्र है.
Acknowledgments
अनुदान / स्रोत संख्या रक्तस्रावी GM053789 शॉक की आण्विक जीवविज्ञान
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 | |
| Circulating heating pad 18"x26" | Harvard Apparatus | py872-5272 | |
| Hot bead instrument sterilizer | VWR international | 11156-002 | |
| Stainless steel tray 8" x 11" | VWR international | 62687-049 | |
| Plexiglass boards (10x15x0.5cm) | University of Pittsburgh Machine shop | ||
| Tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| 50cc conical tube | Any Supplier | ||
| Straight side wide mouth jars (used as cap for nose cone) | VWR international | 159000-058 | |
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR international | 10749-020 | |
| Surgical scissors (straight – 12cm) | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| Hemostats curved -18cm | Harvard Apparatus | 81331718 | |
| Forceps (0.8mm-tip, curved-10cm) | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Gauze 4"x4" | Any Supplier | ||
| 1.5cc microfuge tube | Any Supplier | ||
| Ice bucket | Any Supplier | ||
| Mortar and Pestle | Fisher Scientific | 12-961AA | |
| 1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| 20G needle | Any Supplier | ||
| 1mL pipetteman | Any Supplier | ||
| 1mL pipette tips | Any Supplier | ||
| Falcon polystyrene 8ml tubes | VWR international | 60819-331 | |
| Sterilization pouch 3"x8" | VWR international | 24008 | |
| Sterilization pouch 5"x10" | VWR international | 24010 | |
| MacConkey II Agar plate | BD Biosciences | 221172 | |
| Ethyl Alcohol - 200 proof | Pharmco-AAPER | [70%] | |
| Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution) | OVATION Pharmaceuticals | 70mg/kg | |
| Aerrane (Isoflurane) | Baxter Internationl Inc. | 99.9% | |
| Triadine Povidone Iodine (Betadine) | Triad disposables | ||
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | |||
| Buprenorphine HCl | Bedford Laboratories | 0.1mg/kg |
References
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